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目的观察长期适量饮用茅台酒对DEN引发小鼠HCC发生的影响及可能的机制。方法192只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(C)、茅台酒组(M)、乙醇组(E)、茅台酒+DEN组(MD)、乙醇+DEN组(ED)及DEN组(D),未作任何处理的小鼠即为对照。茅台酒组和乙醇组小鼠分别灌胃给予53%,5ml/kg的茅台酒和乙醇,5天/周直至35周；DEN组小鼠首先于实验第一周腹腔注射一次100mg/kg DEN,第二周再次腹腔注射50mg/kg DEN,以后正常饲养；茅台酒+DEN组及乙醇+DEN组小鼠除接受DEN处理外,分别灌胃给予53%,5ml/kg的茅台酒和乙醇,5天/周直至35周；密切监测小鼠体重等一般情况。分别于实验3周末、13周末及35周末戊巴比妥钠麻醉后处死小鼠,收集血液及肝组织样本。测定各组小鼠肝脏指数及血清丙氨酸转氨酶(alanine transaminase, ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase, AST);检测肝组织匀浆丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的活性,并进行肝组织病理学检查(H&E、Masson和网状纤维染色及透射电镜)；采用免疫组织化学法分析肝组织磷脂酰肌醇聚糖(Glypican-3,GPC3)的表达。采用实时荧光定量RT-PCR、免疫组织化学法和Western-blotting分析小鼠肝组织金属硫蛋白-1/2(MT-1/2)、核因子E2延长因子2(Nrf2)、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC)和调节亚单位(GCLM)的表达。运用定制的SABioscience PCR芯片、实时荧光定量RT-PCR、免疫组织化学法和Western-blotting分析实验鼠肝组织中与乙醇反应、肝纤维化、凋亡、肿瘤抑制及肝脏保护等相关指标的表达；采用POD法和磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(AnnexinV/PI)流式细胞分析法分别检测肝组织细胞凋亡指数及早期凋亡率。结果实验35周后,与其它组比较,ED组小鼠体重显著降低(P<0.05),肉眼及镜下可见明显的肝脏病理改变甚至HCC发生(50%),具有显著增加的肝脏指数(P<0.05)和肝纤维化程度(P<0.05)及GPC3阳性表达(P<0.05)；而MD组小鼠未见明显的生长影响和肉眼可见的肝脏改变,镜下可见部分肝细胞气球样变性、水肿、脂肪变性、局灶性坏死和轻.中度纤维化发生,除1例样本具有轻度的GPC3阳性表达外,其余无GPC3阳性表达。无论3周末、13周末或35周末,M组总是具有与对照组相似的ALT、AST血清水平(P>0.05)；3周末时,与C组比较,E组、D组、MD组和ED组显示了增加的ALT、AST血清水平(P<0.001),ED组ALT、AST血清水平显著高于MD组和/或D组(P<0.05)；13周末及35周末时,ED组仍然具有比其它所有组别显著增高的ALT、AST血清水平(P<0.05),其余各处理组与对照组ALT水平相似。在观察的3个时间点,除M、MD组外,其余各处理组均呈现比C组显著增加的肝组织MDA水平(p<0.05),尤其ED组(p<0.01),但无递增趋势可见。与其它组比较,MD组具有显著增加的MT-1/2mRNA水平(P<0.001)和MTs蛋白水平(P<0.05)；ED组也显示比C组显著增加的MT-1mRNA表达(P<0.05),但具有同C组相似或更低的MTs蛋白表达水平。与C组比较,MD组显示轻度增加的Nrf2或GCLC mRNA和蛋白表达(P<0.05),但ED组总是显示与之相似的Nrf2或GCLC表达水平；无论MD或ED组均未见增加的GCLM mRNA或蛋白表达(P>0.05)。PCR芯片结果显示,单纯的乙醇喂养比等剂量的茅台酒引起显著增加的肝脏基因mRNA表达改变(P<0.05)；与ED组比较,MD组显著上调TAp63、p21、caspase9、Wt1等基因的mRNA表达(P<0.05)；与MD组比较,ED组上调Atm、Fzd7、NQO1、Irs1、 Lefl、Tgfbr2、CK8、CK18基因的mRNA表达(P<0.05)；与C组比较,MD组轻度上调Pten、Rbl、p53等基因的mRNA表达(P<0.05),而ED组显示与C组相似或减少的mRNA表达水平；蛋白水平检测也提示MD组较其它组别显著上调TAp63、p21及paspase9的表达水平(P<0.05).POD原位细胞凋亡检测显示对照组少量肝组织细胞凋亡,单纯的茅台酒或茅台酒+DEN处理显示明显增加的肝组织细胞凋亡(P<0.05),乙醇+DEN显示个别、少量的肝组织细胞凋亡,与单纯的DEN处理组肝组织细胞凋亡程度相似(P>0.05)；单纯的茅台酒或茅台酒+DEN处理显示了比对照组或DEN组增加的早期凋亡率,但差异无统计学意义,却具有比乙醇+DEN处理显著增加的早期凋亡率(P<0.05)。结论与饮用等剂量乙醇比较,5 ml/kg/d饮用茅台酒35周后,DEN引发小鼠具有减轻的肝损伤,未见明显的HCC癌前病变。茅台酒能够显著上调DEN引发小鼠肝组织抗氧化应激指标MTs、Nrf2及其靶基因GCLC表达水平,以及上调肿瘤抑制相关指标TAp63、caspase9及p21的表达水平,这些可能是茅台酒减少酒精与DEN协同引起肝损伤的重要机制之一。为进一步探讨茅台酒与HCC发生的相关性提供了实验依据。