【摘 要】
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目的:观察中医健脾化痰法在体内外抗肿瘤作用并探究其对肺癌EMT的调控机制,为健脾化痰法及以该法为原则的健脾化积方临床应用提供实验依据。方法:（1）体外实验:制备健脾化积方含药血清,采用MTT法和细胞划痕实验观察含药血清对肺癌A549细胞增殖及迁移的影响,采用qRT-PCR和Western Blot实验探究含药血清对肺癌A549细胞中EMT相关标志物E-cad、N-cad、Snail、Slug及Tw
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目的:观察中医健脾化痰法在体内外抗肿瘤作用并探究其对肺癌EMT的调控机制,为健脾化痰法及以该法为原则的健脾化积方临床应用提供实验依据。方法:（1）体外实验:制备健脾化积方含药血清,采用MTT法和细胞划痕实验观察含药血清对肺癌A549细胞增殖及迁移的影响,采用qRT-PCR和Western Blot实验探究含药血清对肺癌A549细胞中EMT相关标志物E-cad、N-cad、Snail、Slug及Twist1 mRNA和蛋白表达的调控作用。（2）体内实验:通过皮下注射肺癌A549细胞构建BALB/c-nu小鼠肺癌皮下移植瘤模型,造模成功后分组干预14d后处死小鼠,比较各组小鼠瘤体体积,并采用qRT-PCR和Western Blot实验研究健脾化积方对肿瘤组织中EMT相关标志物E-cad、N-cad、Snail、Slug及Twist1 mRNA和蛋白表达的调控作用。结果:（1）体外实验:MTT实验结果显示,相较于对照组,浓度为10%-25%的健脾化积方含药血清可有效抑制肺癌A549细胞增殖（P＜0.01）,且抑制作用呈时间-浓度依赖性,含药血清浓度在20%时达到最佳浓度;细胞划痕实验结果显示,含药血清组细胞迁移率显著低于对照组（P＜0.01）;qRT-PCR实验结果显示,相较于对照组,含药血清组E-cad mRNA表达显著上调,N-cad、Snail、Slug和Twist1 mRNA表达均有显著下调（P＜0.01）;Western blot实验结果显示含药血清组E-cad蛋白表达水平显著上调,N-cad、Snail、Slug以及Twist1蛋白表达显著下调;qRT-PCR实验与Western blot实验结果基本一致,证明健脾化积方含药血清对肺癌EMT相关标志物具有一定调控作用。（2）体内实验:皮下注射A549细胞21d后,所有小鼠皮下移植瘤均达到100-150mm3,提示造模成功。造模完成后给予健脾化积方组小鼠中药灌胃处理,对照组小鼠给予灭菌ddH2O灌胃处理,顺铂组小鼠给予0.2mg/ml顺铂溶液腹腔注射。药物干预期间,各组小鼠无死亡,且饮食、饮水及日常活动未见明显差异。药物干预14d后处死小鼠比较各组小鼠瘤体体积,结果显示与模型组相比,健脾化积方组及顺铂组瘤体体积明显缩小,结果具有统计学差异（P＜0.05）;qRT-PCR实验结果显示相较于模型组,健脾化积方组和顺铂组中E-cad mRNA表达明显上调（P＜0.01）,N-cad、Snail、Slug和Twist1的mRNA表达均显著下调（P＜0.05）;Western Blot实验结果显示,相较于模型组,健脾化积方组与顺铂组E-cad蛋白表达水平均有显著上调（P＜0.01）,同时N-cad、Snail、Slug以及Twist1蛋白表达水平均显著下调（P＜0.05）;qRT-PCR实验与Western blot实验结果基本一致,表明健脾化积方对EMT相关标志物有调控作用,即健脾化积方可通过调控肺癌EMT发挥抑制裸鼠皮下移植瘤生长的作用。结论:基于健脾化痰法组方的健脾化积方可有效抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移,并可显著抑制BALB/c-nu小鼠肺癌皮下移植瘤的生长,其作用机制可能与上调E-cad、下调N-cad、Snail、Slug以及Twist1的表达,进而逆转上皮间质转化有关。
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