腺病毒介导人白介素10离体转基因对大鼠移植肝脏保护作用的研究

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第一章研究再灌注损伤的大鼠肝移植模型的建立目的:探讨研究缺血再灌注损伤的大鼠肝移植模型的建立方法,为研究肝脏移植缺血再灌注损伤提供理想的动物模型。方法:采用改良Kamada’s二袖套法,改进肝上下腔静脉缝合及肝脏灌注方法,建立研究缺血再灌注损伤的大鼠肝移植模型。共实施大鼠肝移植120例,其中预实验40例,定型手术80例。结果:80例定型手术中,供肝热缺血时间0~5 min,冷缺血时间90 min,无肝期平均为15~25min,手术成功率为85%(68/80)。结论:大鼠采用改良Kamada’s二袖套法并改进肝上下腔静脉缝合及肝脏灌注方法,可建立稳定的研究再灌注损伤的大鼠肝移植模型。第二章腺病毒载体Ad-hIL-10对大鼠肝移植后再灌注损伤保护作用的研究目的:研究腺病毒载体Ad-hIL-10对IRI的影响及机制。方法:供体选用雌雄不拘SD大鼠,受体选用雄性SD大鼠。采用改良Kamada’s二袖套法并改进肝上下腔静脉缝合及肝脏灌注方法建立肝移植模型。将大鼠分为为假手术组(Ⅰ组);空白对照组(Ⅱ组);空载体对照组(Ⅲ组);基因转染组(Ⅳ组)。分别于移植手术后或假手术后24h处死大鼠,检测血清ALT、AST、AKP、γ-GT,进行IRI程度判定;肝组织HE染色做病理组织学检查;RT-PCR检测法测定肝组织的TNF-a、hIL-10表达水平;TUNEL法检测细胞凋亡。结果:Ⅳ组、Ⅲ组、Ⅱ组与Ⅰ组比较,各组血清ALT、AST、AKP、γ-GT水平明显升高(P<0.05);病理组织学检查发现Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组病变范围及IRI程度均较Ⅰ组明显增加。而Ⅳ组与Ⅲ组、Ⅱ组比较,血清ALT、AST、AKP、γ-GT水平有所减轻(P<0.05);病理组织学检查发现病变范围均较Ⅱ组、Ⅲ组有所降低,细胞凋亡程度减轻;Ⅳ组的TNF-αmRNA显著降低(P<0.05)。结论:Ad-hIL-10能抑制TNF-αmRNA的表达,减轻IRI中肝细胞的调亡,对IRI起保护作用。
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