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研究目的 研制尿液CK20单克隆抗体胶体金试剂盒，为临床筛选和早期发现膀胱肿瘤（BC）提供新的诊断指标。研究内容和结果 本研究首先进行CK20抗原提纯及鉴定，然后是CK20单克隆抗体制备及鉴定，最后制备CK20单克隆抗体胶体金试纸条并初步应用临床。主要研究内容和结果如下：第一部分 CK20抗原提纯及鉴定 以体外培养的人膀胱肿瘤T24细胞为材料，采用阴离子交换色谱法，根据CKs家族成员酸碱性的差别提纯CK20，共获得CK20抗原约1.44mg，SDS-PAGE电泳测得分子量约为46kD,Western-blot显示该抗原与CK20单抗发生特异性反应。说明成功获得了CK20抗原。 第二部分 CK20单克隆抗体制备及鉴定 以纯化所得CK20为免疫原，采用多点注射法免疫BALB/C小鼠，用免疫后的脾细胞与骨髓瘤细胞按1：5比例融合，融合后用HT培养基选择培养，间接ELISA法筛选阳性细胞生长孔，用有限稀释法对阳性孔进行4次克隆后获得一株稳定分泌CK20单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为L20031030，其染色体众数为101(99-103)，将克隆化的杂交瘤细胞接种10只BALB/C小鼠腹腔制备腹水抗体，共收集约50ml血性腹水抗体，经SPA-Sepharose CL-4B亲和层析纯化后，间接ELISA法测得抗体效价为<WP=8>106，双向琼脂扩散法测得该单抗为IgG1亚型，免疫印记实验显示该单抗与T24细胞有特异性反应。第三部分 CK20单克隆抗体胶体金试纸条制备及初步临床应用 制备胶体金标记的CK20单克隆抗体并吸附在硝酸纤维膜上，采用双面胶将该硝酸纤维膜固定在塑料底版上制成检测试纸条。同时用该试纸条、UBC（检测BC的进口金标试剂盒）、BTA（检测BC的进口ELISA试剂盒）检测51例BC患者尿标本，并以19例非肿瘤的泌尿系疾病尿样为疾病对照组，以20例健康人尿液为正常对照组，通过比较三者结果以评价CK20单克隆抗体胶体金试纸条临床应用价值。检测结果显示：CK20单抗试纸条检测结果与BTA之间差异无统计学意义，而略优于UBC；CK20单抗试纸条检测BC的阳性似然比较高（3.12）、阴性似然比较低（0.29），即对BC诊断阳性可能性大，阴性可能性小；CK20单抗试纸条检测的阳性预报值和阴性预报值均比较高（97.7%和78.2%），即诊断正确的可能性大，诊断错误的可能性小。结论 CK20单克隆抗体胶体金试条为国内首创，与国外相关试剂盒相比，成本低，具有检测方法简便、快速，且稳定性、准确性、特异性好及灵敏度高、无创伤性等优点，有较好的临床应用价值，便于各级实验室开展。