【摘 要】
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研究背景与目的:非酒精性脂肪肝疾病（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）是一种无过量饮酒史,以肝细胞脂肪变性和脂质贮积为特征的临床病理综合征。NAFLD不但可导致肝脏病变,还与动脉硬化性心血管疾病、代谢综合征等疾病的高发密切相关。近年来,随着生活方式和膳食模式的转变,非酒精性脂肪肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因,但目前尚无特异性
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研究背景与目的:非酒精性脂肪肝疾病（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）是一种无过量饮酒史,以肝细胞脂肪变性和脂质贮积为特征的临床病理综合征。NAFLD不但可导致肝脏病变,还与动脉硬化性心血管疾病、代谢综合征等疾病的高发密切相关。近年来,随着生活方式和膳食模式的转变,非酒精性脂肪肝病现已成为欧美等发达国家和我国富裕地区慢性肝病的重要病因,但目前尚无特异性治疗药物。TRIM59是TRIM家族成员之一,在肿瘤中具有重要作用,其在NAFLD中的作用目前尚未见报道。我们前期研究发现,TRIM59在肝脏中高表达,同时在炎症应答中发挥重要作用。在本论文中我们将探究TRIM59在NAFLD中的作用及其相关分子机制,期待为临床上NAFLD的防治及相关药物研发分子靶标的选择提供新思路。实验方法:1.分析TRIM59在非酒精性脂肪肝疾病中的表达变化情况1)分离野生型小鼠的肝脏原代细胞,加入不同浓度的油酸处理;2)分别分离进行正常饮食和高脂饮食喂养18周的野生型小鼠的肝脏;3)收集遗体捐赠者的正常和有脂肪病变部位的肝脏;分别提取RNA和蛋白,通过q RT-PCR和Western blot检测TRIM59基因的表达变化。2.高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪肝模型的构建及其表型分析将8周龄的全身TRIM59敲低(TRIM59+/-)小鼠和野生型（WT）小鼠分为四组:1)ND-WT组:野生型（WT）小鼠正常饮食组;2)ND-TRIM59+/-组:TRIM59敲低(TRIM59+/-)小鼠正常饮食组;3)HFD-WT组:野生型（WT）小鼠高脂饮食组;4)HFD-TRIM59+/-组:TRIM59敲低(TRIM59+/-)小鼠高脂饮食组。喂食18周,每周称体重和测血糖,实验结束前进行胰岛素和葡萄糖耐受实验。实验结束时,处死小鼠并分离每只小鼠的血清、肝脏和脂肪。检测血清中总胆固醇（CHOL）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和白蛋白（ALB）浓度;对脂肪进行称重,同时取同一部位的脂肪组织进行固定,制备石蜡切片,通过H&E染色,比较各组间脂肪细胞的大小;取相同部位的肝脏组织进行固定,制备冰冻切片,通过H&E和油红O染色,分析肝脏中脂滴的累积情况;此外,提取肝脏的RNA和蛋白,通过q RT-PCR检测肝脏组织中炎症因子TNFα、IL6和IL1β和脂质代谢等相关基因的表达情况;并对肝脏组织进行TG含量的检测。3.TRIM59敲低促进非酒精性脂肪肝疾病发展的分子机制研究通过qRT-PCR和Wersten blot检测肝脏组织中与脂质代谢等相关的基因及其信号通路。实验结果:1、油酸刺激明显抑制小鼠肝原代细胞中TRIM59的表达;高脂饮食同样抑制小鼠肝脏组织中TRIM59的表达;与正常部位的肝脏相比,有明显脂肪变性肝脏中TRIM59的表达也明显下降。这表明TRIM59可能在非酒精性脂肪肝疾病的发生发展中发挥重要作用。2、全身敲低TRIM59基因明显增加小鼠体重,但不改变血糖和GTT、ITT;增加白色脂肪的含量和脂肪细胞的大小;增加肝脏中脂质的累积同时也增加血清中血脂成分;此外,还增加肝脏组织中炎症因子的产生。3、TRIM59敲低明显增加肝脏组织中CD36和PPARγ的表达;过表达TRIM59明显降低PPARγ蛋白的表达,但不改变其mRNA的水平。结论:1、TRIM59在非酒精性脂肪肝疾病模型中表达降低;2、全身TRIM59敲低可明显促进高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝,其机制可能是通过减少PPARγ的降解来促进CD36表达,从而促进了肝脏中脂质的吸收,最终加重非酒精性脂肪肝疾病的发展。
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