【摘 要】
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体外诊断(IVD)技术受益于免疫学、生物化学、分子生物学等领域的发展,在近二十年间飞速发展并获得了可喜的成果。在细胞治疗过程中,体外多重因子检测具有诸多优势。它可以监测细胞因子风暴和重症患者的治疗效果,以避免病情恶化,还能分清机体炎症/免疫状态,实现精准治疗,同时监测重症患者免疫功能:免疫功能低下或过度免疫抑制。现有一种新型二氧化硅图形编码悬浮芯片能够实现高通量自动化多因子检测,具有灵敏度高,特异
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体外诊断(IVD)技术受益于免疫学、生物化学、分子生物学等领域的发展,在近二十年间飞速发展并获得了可喜的成果。在细胞治疗过程中,体外多重因子检测具有诸多优势。它可以监测细胞因子风暴和重症患者的治疗效果,以避免病情恶化,还能分清机体炎症/免疫状态,实现精准治疗,同时监测重症患者免疫功能:免疫功能低下或过度免疫抑制。现有一种新型二氧化硅图形编码悬浮芯片能够实现高通量自动化多因子检测,具有灵敏度高,特异性强等优点,但是由于芯片储存稳定性较弱而应用受限。本文基于这种图形编码悬浮芯片介绍了一种原位聚合修饰手段,即表面引发原子转移自由基聚合(SI-ATRP),对芯片进行表面聚合修饰后,提高了芯片的储存稳定性,并针对细胞治疗过程中的疗效检测的建立了多因子检测方案。本文通过表面引发电子转移原子转移自由基聚合(SI-ARGET ATRP)修饰的方法,在芯片表面可控聚合生成聚丙烯酸钠高度交联聚合物薄膜;利用抗原抗体特异性反应原理以及高通量悬浮芯片自动反应仪器执行双抗夹心法因子检测,验证动态范围,灵敏度,抵抗非特异性吸附,交叉性以及稳定性等性能:并通过构建CAR-T细胞治疗模型,进行体外细胞实验、小鼠体内实验以及多重细胞因子检测,比较实验结果,判断细胞治疗药效与因子检测结果的关系。相比于未聚合修饰的悬浮芯片在溶剂中4℃储存一个月信号下降28%,三个月后下降50%。通过原位引发原子转移自由基聚合修饰的悬浮芯片在更严苛的温度环境(37℃)下储存一个月信号值在20%误差范围内上下浮动,大大提高了悬浮芯片稳定性。验证聚合修饰悬浮芯片的IL-1β检测灵敏度最高可达到0.1 pg/mL,非特异性吸附能力和多重细胞因子交叉产生的误差均在10%以下。此外,针对实际样本的基质效应也进行了简单的优化,使其检测误差在20%的可接受范围以内。本文中构建了 CD19 CAR-T细胞治疗模型,结合细胞杀伤检测、小鼠活体成像与细胞因子检测三种手段进行分析,三者结果基本一致,细胞杀伤能力与治疗效果会体现在细胞因子的浓度变化上。此次细胞上清Luminex检出率为45.8%,悬浮芯片检出率为81.8%,同时使用Luminex定制试剂盒检测出的有效结果少于聚合修饰悬浮芯片。
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