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成纤维细胞激活蛋白-α(fibroblast activation protein-α，FAP-α)可选择性地表达于90％以上的人类肺、乳腺和大肠癌等恶性上皮癌间质中的肿瘤成纤维细胞膜上。近年来，FAP-α，作为抗肿瘤基质药物治疗研究中的新靶点正受到关注。
目前，关于鼠源性肿瘤间质中FAP-a表达的文献报道甚少。本课题拟筛选表达FAP-a的动物肿瘤模型并开展相关的体内外实验研究。
目的：
本研究通过筛选表达FAP-α的小鼠移植性肿瘤模型，研究FAP-α在肿瘤组织中的表达特点及其诱导表达机制，从而为以FAP-α为靶点的抗肿瘤药物的研究奠定基础。
方法：
1.利用RT-PCR技术初步筛选表达FAP-α的动物肿瘤模型分别建立小鼠移植性4T1乳腺癌模型和B16黑色素瘤模型，以移植瘤组织的基因组DNA为模板扩增FAP-α基因，从mRNA水平上初步筛选表达FAP-α的动物肿瘤模型。
2.FAP-α在肿瘤组织中表达检测分别以4T1细胞和4T1肿瘤组织基因组DNA为模板扩增FAP-α基因，在mRNA水平上检测肿瘤细胞与肿瘤组织表达FAP-α的情况。进一步应用免疫组化技术检测4T1肿瘤组织中FAP-α的表达特点。
3.体外诱导FAP-α表达的探索原代培养大鼠成纤维细胞，光镜下观察其与4T1形态学差异。收集肿瘤细胞上清液、肿瘤细胞匀浆、肿瘤细胞膜、肿瘤细胞悬液，分别与成纤维细胞共孵育24h；建立Transwell共培养体系。应用RT-PCR、免疫组化和Western Blot技术检测上述共培养体系FAP-α诱导表达的情况。
结果：
1.建立了小鼠4T1乳腺癌模型和B16黑色素瘤模型，应用RT-PCR技术，初步在mRNA水平上检测4T1肿瘤组织、B16肿瘤组织表达FAP-a的情况，结果发现FAP-α在4T1肿瘤组织表达，而在B16肿瘤组织中未见表达；其次分别以4T1乳腺癌细胞系和4T1肿瘤组织总RNA为模板扩增FAP-α基因片段，发现FAP-α在肿瘤组织中表达而在肿瘤细胞中不表达；最后利用免疫组化技术在蛋白水平上检测到在4T1肿瘤组织中，FAP-α表达于肿瘤间质中，而在肿瘤细胞中未见表达。
2.原代分离培养大鼠成纤维细胞，建立肿瘤细胞与成纤维细胞体外共培养模型，并通过RT-PCR、免疫组化和Western Blot检测证实了只有在肿瘤细胞与成纤维细胞直接接触共培养后，才能诱导后者FAP-α的表达。
结论：
1.通过基因和蛋白水平的研究证实了小鼠4T1移植瘤组织表达FAP-α，且其表达来源于肿瘤间质而非肿瘤细胞，与FAP-α在人体肿瘤中的表达特点相似，为以FAP-α为靶点的抗肿瘤药物研究提供了理想的动物模型。
2.利用肿瘤细胞与成纤维细胞共培养方法成功地在体外模拟了肿瘤细胞在体内生长的微环境，证实了肿瘤细胞与成纤维细胞接触是诱导后者表达FAP-α的必要条件。由此，本文推测诱导FAP-α表达是通过细胞表面分子的相互作用所实现，并且在鼠类(小鼠、大鼠)中其诱导分子及诱导机制相似。为进一步探索FAP-α诱导表达机制和开展与FAP-α相关的细胞内分子事件的研究工作奠定了基础。