富氢盐水对大鼠脊髓损伤保护作用的实验研究

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目.的:探讨蛛网膜下腔局部灌注富氢盐水对脊髓损伤(SCI)的保护作用及其可能的机制。本研究为富氢盐水治疗脊髓损伤提供实验证据,也为富氢盐水今后用于脊髓损伤的药物治疗提供一定的理论依据。方法:取SD大鼠75只(重量200-250g),采用完全随机法将SD大鼠随机分为三组:A组;B组(SCI后氢水干预组);C组(SCI后生理盐水对照组),每组25只。又根据不同观察时间6h、24h、48h、1w、2w把A、B组和C组随机各分为A1、A2、A3、A4、A5; B1、 B2、B3、B4、B5和C1、C2、C3、C4、C5组,每小组5只。B、C组采用改良Allen’s撞击法建立脊髓损伤模型并置硬膜内导管。A组打开椎板后不损伤脊髓,行蛛网膜下腔导管置管。各组大鼠术后相应时间点行BBB评分后,取相应脊髓组织行HE染色病理学观察、行降钙素基因相关肽(CGRP)免疫组化染色对平均OD(optical density)值进行统计分析;并通过免疫组化法对含半胱氨酸的门冬氨酸特异水解酶-3(Caspase-3)进行检测,对阳性细胞计数,各组大鼠各时间点处死前行心脏抽血查丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)进行统计学分析。结果:1.运动功能评定(BBB评分法):A组各组评分均为正常的21分;术后24h、48h、1w、2w,B组在相应时间点的评分高于C组(P<0.05)。2.HE染色:A组细胞结构完整,脊髓组织结构致密,细胞核显染且居中,核仁显染。SCI后C1较B1组炎症反应严重;C2组较B2组炎症反应严重,B3组神经元萎缩且炎性反应较C3组轻;B4组较C4组神经元萎缩轻;B5组较C5组疤痕形成少。3. CGRP OD值:术后24h、48h、1w、2w, B组在相应时间点的OD值高于C组(P<0.05)。4. MDA水平检测:术后24h、48h、1w、2w, C组在相应时间点的MDA水平高于B组(P<0.05),且B组在相应时间点的MDA水平高于A组(P<0.05)。5.SOD水平检测:术后24h、48h、1w、2w,B组在相应时间点的SOD水平高于C组(P<0.05)。6. Caspase-3免疫组化检测:术后24h、48h、1w、2w,C组在相应时间点Caspase-3的阳性细胞数目高于B组(P<0.05),且B组在相应时间点Caspase-3的阳性细胞数目高于A组(P<0.05)。结论:1.富氢水通过减轻脊髓损伤早期氧化应激反应和炎症反应,后期通过增强机体抗氧化能力,进而抑制细胞凋亡,促进肢体运动功能恢复。2.富氢水早期通过减轻SCI神经细胞内CGRP的下降,后期上调CGRP的表达进而保护神经细胞。
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