渐危药用植物黄檗产活性成分内生真菌的初步研究

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本文选用珍稀药用植物黄檗,采用常规的内生真菌分离方法,从其中分离出了13种内生真菌,并以此为对象进行以下研究工作。 结合内生真菌的生长曲线,检测生物碱的沉淀反应和盐酸小檗碱的特异性反应,对所得菌株进行初筛得到S6和L2可能产小檗碱;通过扩大培养,利用薄层层析(TLC)进行复筛,得到一株产小檗碱的内生真菌菌株S6;对S6发酵培养物中有效成分的提取过程进行了摸索。 通过对S6的扩大培养,对提取物的TLC进行薄层扫描,发现提取物的吸收曲线与标准品的吸收曲线近似;提取物的红外光谱检测(IR)和核磁共振(NMR)的氢谱检测结果显示:S6培养液提取物的图谱中含有标准品图谱中比较多的基团和键。据此判断,所得到的S6提取物应为盐酸小檗碱。 通过对不同固体培养基中菌丝的生长速率和长势分析,筛选出实验室中适合s6菌株生长的固体培养基;通过对不同液体培养基中S6的生物量和代谢产物产生量的对比,筛选出适合S6菌丝生长及产生物碱的液体培养基;利用最适液体培养基对其中的碳源、氮源、pH和最适温度进行了筛选,结果显示,麦芽糖,尿素,pH7.0和发酵温度28℃分别是相应的最佳条件。 采用L16(43)正交实验,进一步优化了菌株S6的发酵条件,得出最佳初始培养条件为:麦芽糖15g.L-1,尿素4.3 g.L-1,pH7.0左右,装液量150mL/300mL,培养温度28℃,此配比也可做为菌株S6实验室的液体种子培养基的配比;次生代谢产物积累时的适宜发酵条件为:麦芽糖15g.L-1,尿素5.3 g.L-1,pH7.0左右,装液量100mL/300mL,培养温度28℃。
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