厚壳贻贝多糖MPs分离纯化、理化性质与立体结构测定及生物学活性研究

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目的:分离纯化得到不同纯度厚壳贻贝多糖(Mytilus coruscus polysaccharides,MPs),并测定其理化性质,包括糖含量测定、纯度鉴定、分子量测定、单糖组分分析、糖苷键类型证明、一维和二维结构测定;纯化得到纯品进行生物学活性探索。方法:1.厚壳贻贝多糖MPs的分离纯化 用组织匀浆后热水抽提,Sevag法除蛋白,乙醇沉淀,再经DEAE-cellulose 52、Sephacryl S-200 HR柱层析和高效液相色谱(HPLC),分离纯化得到贻贝多糖纯品MPs。2.厚壳贻贝多糖MPs的理化性质与结构测定 制备得到多糖样品行全波段的最大吸收波长光谱扫描和硫酸—苯酚比色法测定糖含量;经紫外光谱扫描分析、染料结合比色法、HPLC、聚丙烯酰胺电泳鉴定其纯度,凝胶过滤法测量分子量,红外光谱扫描分析多糖特征吸收谱和糖苷键类型,再经薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)进行单糖组分分析,NMR测定多糖纯品的一维和二维结构。3.厚壳贻贝多糖MPs的生物学活性研究 厚壳贻贝多糖纯品MPs-B1溶液,分别行MTT比色法测定大鼠睾丸支持细胞的存活率以了解其促进睾丸支持细胞增殖作用,和流式细胞仪测培养基内含MPs-B1的K562细胞凋亡比例以研究其抑制肿瘤细胞生长的作用。结果: 热水抽提、Sevag法除蛋白和乙醇沉淀制备得到贻贝多糖粗品(Crude Mytilus coruscus polysaccharides,CMPs),呈淡黄色粉末状,吸水性强,水溶解度佳。CMPs经DEAE-cellulose 52、Sephacryl S-200HR柱层析得到半纯品多糖MPs-A、MPs-B、MPs-C,再经HPLC后分别分离并纯化得到各个不同组分:MPs-A1/A2/B1/B2/B3/C1/C2/C3,均呈白色粉末状,水溶性好。以硫酸—苯酚比色法、
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