论文部分内容阅读
研究HPV三个最流行高危亚型HPV16型、HPV18型、HPV45型的E7蛋白的生物学特性，构建3个亚型的E7蛋白重组表达载体进行重组蛋白的表达和鉴定。以HPV16，HPV18，HPV45的cDNA文库为模板，采用PCR技术扩增其E 7基因，用NcoI和XhoI酶切PCR产物和pET32a载体，构建HPV16E7/pET32a、HPV18E7/pET32a、HPV45E7/pET32a原核表达载体，转化宿主菌，诱导表达重组蛋白，并利用镍离子亲和层析技术纯化重组蛋白。
HPV16E7/pET32a、HPV18E7/pET32a、HPV45E7/pET32a原核表达载体转化BL 21 fDE3)宿主菌后重组蛋白能够高效表达，鉴定重组蛋白表达的正确性并通过镍离子亲和层析纯化得到纯度较高的重组蛋白。
HPV16E7/pET32a、HPV18E7/pET32a、HPV45E7/pET32a原核表达载体的构建、E7融合蛋白的表达为进一步深入研究三个最流行高危HPV亚型E7蛋白之间的联系和生物学特性，为HPV治疗性疫苗的研究，抗E7单克隆抗体的制备以及以体内E7抗体水平检测为手段的宫颈癌诊断方法的建立奠定基础。