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目的炎症反应的增强和炎症阶段的无限延长是导致糖尿病伤口愈合延迟的主要原因。炎症主要是由巨噬细胞分泌的大量炎症介质所诱导产生的,当糖尿病伤口处于紊乱状态时,巨噬细胞可以分泌肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α),核因子-κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB),白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和Toll样受体-4(Toll-like receptors-4,TLR-4)等炎性细胞因子。这些炎性因子导致周围内皮细胞迁移能力的下降以及血管的病变,最终阻碍了糖尿病伤口的愈合过程。姜黄素(Curcumin,Cur)是一种有效的抗炎性药物,但由于溶解性差,释药时间短等局限性使其应用效果显著下降。因此,迫切需要开发一种有效的载体改善Cur的应用局限性,提高Cur的应用效果。本课题的目的是制备Cur负载的壳聚糖(Chitosan,CS)纳米颗粒(Cur-CS-NPs)。通过细胞学实验和药效学实验研究Cur-CS-NPs对巨噬细胞所介导的炎症的抑制作用和其对皮肤伤口修复的研究。方法本课题建立Cur的体外含量测定方法,并对其线性、精密度和回收率等方法学进行考察。由于CS的游离氨基可以与多聚磷酸钠(Sodium tripolyphosphate,TPP)的阴离子发生离子交联反应,因此以Cur,CS和TPP为原料,采用离子交联的方法制备Cur-CS-NPs。通过单因素考察实验对Cur-CS-NPs的制备方法进行处方筛选和优化。利用透射电子显微镜、纳米粒径电位分析仪、紫外-可见分光光度仪等仪器考察所制备的Cur-CS-NPs的形态、粒径、Zeta电位、包封率和体外药物释放模式等参数。在细胞学实验中,通过MTT比色法考察Cur-CS-NPs对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(Mouse leukemia cells of monocyte macrophage,RAW 264.7)生长情况的影响。利用激光共聚焦显微镜检测RAW264.7对Cur-CS-NPs的摄取能力。通过对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的划痕实验和Transwell实验考察Cur-CS-NPs对细胞迁移能力的影响。通过血管生成实验,探究Cur-CS-NPs对血管生成的影响。应用蛋白免疫印迹实验(Western Blot)检测Cur-CS-NPs处理后的RAW264.7细胞上清液和HUVECs细胞中炎性因子和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)等蛋白的表达水平。在动物实验中,建立糖尿病大鼠模型和糖尿病大鼠皮肤伤口模型,对伤口愈合质量进行评价,考察Cur-CS-NPs对伤口愈合过程的治疗效果。将不同时间段所获得的皮肤伤口组织进行H&E染色,探究伤口中各类细胞和组织的变化情况。结果本文建立的对Cur的定量分析方法的线性、精密度、重复性以及回收率等均符合方法学要求,确定本方法可以用于Cur的体外含量测定。通过单因素分析实验确定最优处方,最终获得结构完整,呈单分散的均一球状Cur-CS-NPs。Cur-CS-NPs的平均粒径为91.28±4.30 nm,Zeta电位为21.9±2.1 m V。在释放实验中,Cur-CS-NPs较Cur-Free释放缓慢,延长了Cur的释药时间。在细胞学实验中,利用MTT比色法验证了Cur-CS-NPs对RAW 264.7无明显毒性,且确定细胞学实验所用的Cur浓度为5μg/m L和45μg/m L。通过激光共聚焦显微镜观察RAW 264.7对Cur-CS-NPs的摄取过程,结果表明Cur-CS-NPs有效增强了RAW 264.7对于Cur的摄取能力。并且在血管生成实验和细胞迁移实验中证实Cur-CS-NPs能够促进HUVECs的迁移以及血管生成。Western Blot实验考察了Cur-CS-NPs对细胞蛋白表达水平的影响,结果显示,Cur-CS-NPs能有效抑制巨噬细胞分泌炎症因子,提高了HUVECs中促增殖因子和促血管生成因子的表达。在动物体内实验中,与PBS组和游离姜黄素组(Cur-Free)相比,Cur-CS-NPs显著提高了伤口愈合的速度和质量。结论Cur-CS-NPs减轻了糖尿病伤口中RAW 264.7所引起的炎症,从而促进了HUVECs的迁移能力和血管生成能力,使糖尿病伤口由炎症期转为增殖期,实现了加速伤口愈合的作用。因此,Cur-CS-NPs有望成为一种通过减轻糖尿病大鼠皮肤伤口模型中的炎症反应来加速糖尿病伤口愈合的有效治疗策略。