【摘 要】
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牛传染性鼻气管炎（infectious bovine rhinotracheitis,IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起的一种以严重呼吸道及生殖道感染为主要症状的急性接触性传染病,目前该病已呈世界性分布,给全球养牛业造成了严重影响,因此,建立一种快速、准确的血清学诊断方法对IBR的防控具有重要意义。本研究通过原核表达获得gD蛋白,利用双抗原夹心法成功制备IBRV抗体检测试纸,还尝试利
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牛传染性鼻气管炎（infectious bovine rhinotracheitis,IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起的一种以严重呼吸道及生殖道感染为主要症状的急性接触性传染病,目前该病已呈世界性分布,给全球养牛业造成了严重影响,因此,建立一种快速、准确的血清学诊断方法对IBR的防控具有重要意义。本研究通过原核表达获得gD蛋白,利用双抗原夹心法成功制备IBRV抗体检测试纸,还尝试利用间接法制备试纸,为临床快速检测IBRV抗体及其他病原抗体检测试纸的制备提供理论和技术支撑。1.利用PCR法扩增IBRV gD基因,构建表达载体pET-32a-gD,诱导表达后,利用镍离子亲和层析法纯化变性gD蛋白,经复性浓缩后,对其进行分析与鉴定。结果表明gD蛋白的分子量约为53 k Da,纯化复性浓缩后的蛋白质量浓度为4.02mg/m L,经Western-blot及间接ELISA分析,该蛋白具有良好的反应原性,为后期IBRV抗体检测试纸的研究奠定基础。2.以IBRV标准阳性血清作为检测靶标,将制备的金标gD蛋白包被于结合垫作为检测探针,将gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠Ig G与羊抗鼠Ig G作为独立质控系统,成功制备胶体金免疫层析试纸。经检测,该试纸具有良好的特异性与敏感性,与进口商品化ELISA试剂盒的总符合率为96.7%,该试纸为临床血清定性检测IBR提供了有效工具。同时也尝试利用间接法制备胶体金免疫层析试纸,但未获成功。
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