论文部分内容阅读
罗伯逊易位包含罗伯逊融合和罗伯逊断裂两个内容，融合和断裂的位置都位于着丝粒处，着丝粒主要有动粒和着丝粒DNA两个构架，其中着丝粒DNA对维持染色体的空间结构、黏附姐妹染色单体、组装着丝点、遗传重组等都具有重要作用。猪着丝粒DNA重复序列分为两个家族，即MC1和AC2。MC1是由340bp的重复单体串联组成，分布于猪的中或亚中着丝粒染色体(1-12)和X染色体上，而AC2主要是由14bp单体构成的重复序列组成，位于所有的端着丝粒染色体(13-18)上。
根据已报道的家猪着丝粒卫星DNA序列设计引物，对正常家猪基因组DNA进行PCR扩增，得到家猪着丝粒区域的AC2卫星DNA序列，采用凝胶回收试剂盒将800bp、500bp、250bp的序列进行切胶回收，回收片段经纯化后连接到pGEM-Teasy载体，分别挑取3种回收片段的阳性克隆进行序列测定，序列测定后，以AC2序列的克隆质粒作为探针前体，采用PCR法将Dig-dUTP随机插入DNA中，而使DNA被标记，随后利用荧光原位杂交的的方法，对扩增片段进行家猪中期染色体定位并对13/17易位染色体进行检测，结果如下:
1、AC2序列分析结果表明800bp左右克隆的长度为857bp;500bp左右的克隆两个506bp和552bp;250bp左右克隆的长度为263bp。使用NCBI的BLAST工具，进行比对分析，分析结果表明:857bp前半部分222bp的片段与NCBI序列同源性高达94％，后半部分NCBI没有报道。同时857bp与263bp序列同源性为86％，与506bp和552bp序列的同源性为72.32％，说明可能857bp的片段，由263bp的片段和506bp或552bp共同进化而来。一般认为不同的熏复单体在基因组进化过程中起源于同一个祖先片段，通过一个或者多个短的原始片段经过复制或不均等交换、碱基取代和进一步复制和缺失产生。
2、FISH检测结果显示杂交信号位于家猪端染色体着丝粒区域，但杂交信号在端染色体着丝粒区域强度并不一致，说明不同染色体AC2重复序列重复单元的拷贝数不同，同时13/17易位染色体着丝粒区域有杂交信号，说明虽然13/17易位染色体的着丝粒虽然融合为亚中着丝粒，但着丝粒区域卫星DNA含有端染色体着丝粒AC2卫星DNA。