论文部分内容阅读
前言 凋亡的分子机制研究表明：Caspase(天冬氨酸依赖的半胱氨酸蛋白水解酶)家族是直接导致凋亡细胞解体的蛋白酶系统，在细胞凋亡机制网络中居中心地位。Caspase家族中，Caspase-3处于蛋白酶级联反应的核心位置，在细胞凋亡信号传导过程中被其上游蛋白酶切割激活后能直接水解多种负责细胞生化和形态学改变的底物而致细胞凋亡。它的失活或表达降低与多种肿瘤的发生发展相关，但在胃癌及其癌前病变方面相关报道不多。本研究检测人胃癌及有关胃黏膜癌前病变细胞中Caspase-3蛋白的表达，分析它与细胞增殖(Ki-67 SABC免疫组化检测)和凋亡(TdT介导的dUTP生物素缺口末端标记法，TUNEL法)的关系，旨在探讨Caspase-3在胃癌发生发展过程中的生物学意义及相关分子病理学机制。 材料与方法 1．临床病例资料 存档胃镜石蜡标本184例。包括正常对照、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生和胃癌分别为13，6，31，114，20例。不典型增生按照轻中重度分别为40，64，10例；按照组织学分型，分别为腺瘤型43例、再生型22例、隐窝型46例、球样型3例。所有病例男女比例2.24：1；年龄27-73岁(平均55岁)。 2．实验方法和结果判定 采用SABC免疫组织化学方法检测上述胃黏膜标本中Caspase-3蛋白表达(DAKO公司，工作浓度已200入比较它与细胞增殖（hi67SABC免疫组化检测）和细胞凋亡（原位末端标记法一TUNEL法检测）的相关关系。按照特异性反应强度将结果分为：阴性（一人＜5％；弱阳性（十八 5％－25％；中度阳性（＋十八25％－50％；强阳性（＋十叫，＞50％。每例随机选择5个代表性视野采用计算机辅助图象分析方法进行图象域值分割并计算阳性标记指数（Wing Index，LI人计算公式：11一阳性细胞域值面现同类计数细胞总域值面积 X 100％。 3．统计分析：采用SPSS10．0统计软件进行卡方检验／一检验以及直线相关检验。 实验结果 Caspase－3蛋白阳性反应产物呈棕黄色细颗粒，定位于胞浆。在正常胃睛膜，Caspase－3阳性细胞主要位于表层上皮，而胃小凹腺颈部增殖带及深部腺体细胞Caspase－3呈阴性或弱阳性表达；从胃钱膜深层到表层Caspase－3阳性细胞从少到多，从弱到强，呈明显的极性分布。从萎缩性胃炎、肠上皮化生及不典型增生到胃癌过程中，Caspase－3蛋白阳性细胞极性分布逐渐消失，而C。p。e－3阳性率和阳性指数逐渐升高至肠上皮化生到达顶峰O，97％；阳性指数 LI＝70．86 29．27X随着不典型增生的出现而下降，至胃癌最低（6／20，30％；LI＝26·8518·03人 CasPase一 3蛋白表达在 1型（20，11阮）、11型（11／12，92％）、血型（7／17，100％）肠上皮化生组织间无显著差异h＞0．05人在不典型增生各组织学类型间也无显著差异（腺瘤型 30／43，70％山一49．68t15．42；隐窝型40／46，87阮；LI＝56．44 ill．25；球样型3／3，100％；LI＝47．35 i 22．06；再生型 18／22，82阮；LI＝58．80 t21．61，p＞0．05八 TUNEL阳性信号为大小不一、圆形或环状蓝紫色颗粒，位于细胞核。在正常胃新膜、萎缩性胃炎、肠化及不典型 ·二·增生和胃癌中的分布变化趋势同 Caspase－3；二者呈显著正相关（相关系数r＝0．94；p＜0．of八hi67棕黄色阳性颗粒位于细胞核；正常胃钱膜增殖细胞数量少，散布于胃小凹腺颈部增殖区；不典型增生细胞增殖活性明显增强且呈簇状或灶性分布。不典型增生和胃癌组织Ki67表达显著高于正常对照、慢性萎缩性胃炎和肠上皮化生冲＜0．of人 Ki67表达与 CasPase－3呈负相关趋势，但无显著统计学意义（相关系数 r＝－0．28，P＞0．05入肠型胃癌和弥漫型胃癌hi67阳性事无显著差异门，100％ys．10／10，1＊畅f 1．18土 9．Zo vs．78．8二士互互．13，p＞0．05）。 讨 论 在正常胃部膜和萎缩性胃炎伴肠上皮化生或不典型增生乃至胃癌组织中，CasPase－3蛋白表达与TUNEL阳性细胞指数呈显著正相关k＝0．94，P＜0．0X而与 Ki67蛋白表达呈一定程度负相关。据此推测，胃影膜病变的凋亡异常与Caspase－3蛋白的失活或低表达密切相关。从萎缩性胃炎到肠化生、不典型增生以至胃癌过程初期，在各种促凋亡信号刺激下，CasPase－3被激活参与清除DNA受损细胞的工作，这时的凋亡可能还是细胞周期依赖性的；而随着病变加剧及受损细胞的增多，Caspase－3及正常凋亡系统成分无力全部清除这些细胞，致使DNA受损细胞累积数量更多且更易受损，CasPase－3本身可能就因此而失活，导致不典型增生后期细胞凋亡指数下降，DNA受损细胞的存活量增加，出现异型细胞低凋亡高增殖的状态，最终导致胃癌的发生。在胃钱膜癌前病变到胃癌的演化过程中，由于CasPase－3等基因或蛋白的失活或低表达，导致细胞凋亡逐渐受抑的直接结果就是胃钱膜受损细胞凋亡减少、细胞生存期延长，细胞恶性演变几率增加，这可能是胃癌发生、浸润及转移的