【摘 要】
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现今,纳米科技已逐渐成为生命科学研究中极为有效的工具,发展了许多新的标记技术,并将成为下一代生物标记物的典范;同时,现代质谱技术是近年来发展较为迅速的分析检测技术之
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现今,纳米科技已逐渐成为生命科学研究中极为有效的工具,发展了许多新的标记技术,并将成为下一代生物标记物的典范;同时,现代质谱技术是近年来发展较为迅速的分析检测技术之一,并以其快速、准确、灵敏等优点受到生物学家的关注。
根据以上两个方面的研究进展,本论文创新性地提出基于有机分子质量数作标签进行编码生物分子探针的方法,将纳米生物技术、质谱技术和分子自组装技术等有机的结合在一起,制备出有机分子条码的DNA纳米探针:将不同分子量的有机分子和相应的DNA探针同时组装到金纳米粒子表面。
我们利用研制的纳米探针,结合DNA芯片技术、磁珠分离技术,经过夹心式杂交的方法,采用基质辅助激光解析——飞行时间质谱检测条码分子的信号,直接检测得到的纳米探针上的条码分子质谱信号,从而得到目标生物分子的信息,实现了对待检测生物分子,特别是DNA分子检测的研究目标。在没有完全优化实验参数的情况下,采用芯片进行的实验,检测限在100pM以下,并且实现了双重检测,为今后高通量检测研究打下了基础;采用磁珠分离的实验,检测限可达到10fM以下。
本论文研制的探针具有如下的特色和创新:
1、纳米探针采用含硫分子在金表面自组装的技术制备,避开了现有技术需要通过有机反应将编码有机小分子偶联到生物分子的情况;
2、利用有机小分子的质量数的不同实现生物分子探针的编码,并对检测信号起到放大作用,实现高灵敏度检测。
3、建立了不需分离纯化可直接检测目标分子的方法。
4、有机小分子标签质量范围宽,可实现高通量质谱检测。
这样的编码技术不仅可以用于核酸检测,也可以用于蛋白和糖类的检测。这种探针技术将在基因组学、蛋白质组学等研究中有着良好的应用前景。
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