论文部分内容阅读
第一部分GALNT14在胰腺癌中的表达及其作用机制研究目的:明确GALNT14在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌患者临床病理因素及预后的关系;明确GALNT14对胰腺癌细胞生物学行为的影响及其对吉西他滨化疗抵抗的作用效应。方法:（1）从生物信息数据库GEO、Xena、ArrayExpress和GSA获取胰腺癌相关数据集 GSE62452、GSE15471、GSE62165、GSE71729、GSE17891、GSE11838、PACA-AU、TCGA-PAAD、E-MTAB-6134、CRA001160,比较胰腺肿瘤组织与正常组织中GALNT14的表达水平,单细胞水平评价GALNT14在胰腺癌组织中的表达情况,同时评估GALNT14高表达患者与低表达患者的生存差异,并结合患者临床病理因素进行相关性分析;（2）比较GALNT14在胰腺癌不同分子亚型（Collisson、Moffitt、Bailey和Puleo）中的表达差异;（3）构建GALNT14过表达胰腺癌细胞,CCK8检测细胞增殖情况、流式细胞术检测细胞周期分布变化情况、划痕实验检测细胞迁移情况;（4）对胰腺癌细胞株进行吉西他滨耐药诱导,Western blotting检测相关分子信号通路变化情况,同时通过CCK8检测吉西他滨的抗肿瘤疗效。结果:（1）胰腺肿瘤组织中GALNT14的表达明显高于正常组织,高表达GALNT14的胰腺癌患者生存时间明显缩短;并且GALNT14的表达水平与患者年龄、糖尿病病史、肿瘤分期、分子分型及TP53突变相关;（2）GALNT14在胰腺癌不良预后分子亚型中的表达明显升高;（3）CCK8和划痕实验表明GALNT14过表达能够促进细胞增殖和迁移;流式细胞术检测细胞周期表明GALNT14过表达细胞G0/G1期比例减少,S期比例增加;（4）GALNT14过表达细胞ERK磷酸化增加、间充质标志物（SNAI1、N-cadherin）表达增加、上皮标志物（E-cadherin）表达减少;而耐药细胞株GALNT14表达增加、间充质标志物（SNAI1）表达增加、上皮标志物（E-cadherin）表达减少;CCK8实验表明GALNT14减弱吉西他滨的抗肿瘤疗效。结论:GALNT14在胰腺癌肿瘤组织及不良预后亚型中表达升高,GALNT14上调是胰腺癌患者的不良预后因素。GALNT14过表达能够促进细胞增殖和细胞迁移,同时降低吉西他滨的抗肿瘤疗效。第二部分EMT基因集评价胰腺癌预后的作用初探目的:通过生物信息学方法建立EMT基因集风险评分并明确其对胰腺癌患者预后评估的作用。方法:从生物信息数据库GEO、ICGC、Xena和ArrayExpress获取胰腺癌相关数据集 GSE16515、GSE15471、GSE2873 5、GSE62165、GSE71729、PACA-AU、PACA-CA、TCGA-PAAD、E-MTAB-6134 后,进行以下分析:（1）GSVA 和 GSEA评估 EMT 在胰腺癌肿瘤组织中的激活情况;（2）LASSO COX回归分析筛选构建胰腺癌预后相关EMT基因集;（3）Logistic回归和ROC评估基因集在胰腺癌不良预后分子亚型中的诊断价值;（4）COX单因素和多因素分析确定独立预后因素;（5）构建列线图评估EMT基因集的预后评估效果。结果:（1）与正常组织相比,EMT在胰腺肿瘤组织中显著激活（数据集GSE15471、GSE16515、GSE28735、GSE62165 和 GSE71729 的 EMT 基因集标准化富集评分 NES分别为3.01、2.48、2.68、2.80和2.37）;（2）基于EMT基因集的风险评分与胰腺癌患者预后显著相关（PACA-AU 数据集:HR=2.39,95%CI:1.73-3.3,p＜0.0001;E-MTAB-6134 数据集:HR=1.66,95%CI:1.24-2.23,p=0.00062;PACA-CA 数据集:HR=2.15,95%CI:1.59-2.91,p＜0.0001;TCGA-PAAD 数据集:HR=1.98,95%CI:1.26-3.1,p=0.0025;GSE71729 数据集:HR=2.21,95%CI:1.42-3.45,p=0.00035）;（3）EMT基因集可用于识别胰腺癌不良预后分子亚型,其在不同分子亚型中均能获得较好的AUC值,分别为:Moffitt队列:0.86,Bailey队列:0.88,Puleo队列:0.88,TCGA-PAAD队列:0.94;（4）基于肿瘤分级、手术切缘、淋巴结受累、CDKN2A突变和EMT基因集风险评分构建列线图结果显示,EMT基因集风险评分可用于预测胰腺癌患者生存情况。结论:EMT在胰腺癌组织中显著激活且与胰腺癌患者的预后相关;基于EMT基因集的风险评分能够评估胰腺癌患者预后,具有重要临床应用价值。同时EMT基因集可用于识别胰腺癌不良预后分子亚型。