低强度瞬态电磁场导致细胞膜穿孔的研究

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本实验采用超宽频带横电磁传输室(BTEM Cell)在低强度瞬态电磁场(Low-intensity Transient Electromagnetic Pulses, LTEMP)作用下,分别从细胞膜通透性的变化,电转染,电融合以及细胞膜的表面形态变化等几个方面研究了LTEMP导致细胞膜穿孔的生物学非热效应。 在研究细胞膜通透性变化的实验中发现:在LTEMP作用下,细胞内的蛋白质能够从红细胞逸出;异硫氰酸荧光素标记抗体能够进入兔红细胞内部;台盼蓝染料能够进入穿孔后的猪精子内,其中照射20min的精子电穿孔率为0.35%,照射60min的精子电穿孔率为0.54%。 在研究LTEMP对细胞电转染的实验中发现:鸡的微小染色体在电磁场处理后能够进入兔红细胞,电磁场照射20min和40min掺入鸡微小染色体的比率分别为1.9%和1.2%。 在研究LTEMP对细胞电融合的实验中发现:LTEMP作用能够诱导鸡和鸡红细胞、鸡和兔红细胞、兔和兔红细胞之间的细胞融合,电磁场处理40min和80min的电融合率分别为0.28%和0.52%;LTEMP结合小剂量PEG作用能够诱导猪淋巴细胞融合和熟前染色体凝集(premature chromosome condensation, PCC),其中细胞融合率为1.84%(包括PCC发生率),PCC发生率为0.17%。 在细胞的表面形态观察中发现:在LTEMP照射20min的兔红细胞膜上观察到电致孔洞,穿孔的频率为20%,孔近于规则的圆形,孔的边缘光滑,孔的直径为0.5-1.0μm;在猪精子的扫描电镜观察中,照射20min预加0.1mL戊二醛,照射100min预加0.2mL戊二醛和照射100min预加0.3mL戊二醛这三组样品中发现细胞有明显的穿孔现象,穿孔均发生在精子的头部,孔洞直径为0.2-0.7μm,孔洞形状不规则。
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