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第一部分乳头内注射示踪剂检测大鼠腋窝前哨淋巴结的初步可行性研究目的:探究采用乳头内注射示踪剂方式检测大鼠腋窝前哨淋巴结（Sentinel lymph node,SLN）的可行性,为寻找SLN注射示踪剂提供不同的注射部位和方法,并对比乳头内注射条件下,不同示踪剂及组合示踪SLN效果,为进行SLN特异性定位提供实验依据。方法:Sprague-Dawley成年雌性大鼠50只,随机分为5组,每组10只,选取大鼠第三对乳腺作为示踪剂注射部位,每只大鼠左侧采用乳晕区皮内注射、右侧采用乳头内注射方式注射示踪剂（组1:亚甲蓝（Methylene blue,MB）0.05m L（浓度1%）联合吲哚菁绿（Indocyanine Green,ICG）0.1m L（浓度0.125mg/m L）,组2:ICG 0.1m L（浓度0.125mg/m L）,组3:MB 0.05m L（浓度1%）,组4:99mTc硫胶体0.01ml（比活度2.5m Ci/m L-5.0 m Ci/m L）联合MB 0.05m L（浓度1%）,组5:99m Tc硫胶体0.01ml（比活度2.5m Ci/m L-5.0 m Ci/m L））,组1和组2示踪剂注射完成后立即应用飞摩尔远红外脉管系统探测成像仪、组4和组5在大鼠处死前应用γ射线探测仪探测示踪剂积聚SLN的体表定位并进行标记;组1、组2、组3和组4在示踪剂末次注射结束10分钟、组5在体表定位结束后解剖大鼠双侧腋窝,按照体表定位标记寻找目标淋巴结并记录个数,以SLN的检出数目、前哨淋巴结活检（Sentinel lymph node biopsy,SLNB）检出成功率作为评价指标,对比并分析每组示踪剂或组合采取乳晕区皮内注射和乳头内注射方式两个指标的差异。以99m Tc硫胶体联合MB双示踪法作为参照,分别比较在乳头内注射方式下ICG联合MB双示踪法、MB、ICG、99m Tc硫胶体单示踪法SLN检出数目及SLNB检出成功率的差异。使用Microsoft Excel和SPSS 25.0统计学软件对数据存储和分析,非正态分布计量资料以M（Q1,Q3）表示,比较采用秩和检验,计数资料以例数或百分比表示,比较采用c2检验。P＜0.05认为差异有统计学意义。结果:乳头内注射与乳晕区皮内注射方式SLN检出数目比较:ICG联合MB双示踪法:乳头内注射（3.0枚）vs乳晕区皮内注射（2.0枚）（Z=-2.584,P=0.01）;ICG单示踪法:乳头内注射（3.0枚）vs乳晕区皮内注射（2.0枚）（Z=-1.770,P=0.077）;MB单示踪法:乳头内注射（2.0枚）vs乳晕区皮内注射（1.5枚）（Z=-0.438,P=0.661）;99m Tc硫胶体联合MB单示踪法:乳头内注射（2.0枚）vs乳晕区皮内注射（2.0枚）（Z=-0.448,P=0.654）;99m Tc硫胶体单示踪法:乳头内注射（3.0枚）vs乳晕区皮内注射（3.0枚）（Z=-0.642,P=0.521）。乳头内注射与乳晕区皮内注射方式SLNB检出成功率比较:ICG联合MB双示踪法:乳头内注射（100%）vs皮内注射（100%）;ICG单示踪法:乳头内注射（100%）vs皮内注射（100%）;MB单示踪法:乳头内注射（100%）vs皮内注射（100%）;99mTc硫胶体联合MB双示踪法:乳头内注射（90%）vs皮内注射（100%）（c2=6.906,P=0.05）;99m Tc硫胶体单示踪法:乳头内注射（100%）vs皮内注射（100%）。乳头内注射方式条件下不同示踪剂及组合SLN检出数目比较:ICG联合MB双示踪法（3.0枚）vs99m Tc硫胶体联合MB双示踪法（2.0枚）（Z=-2.640,P=0.083）;ICG单示踪法（3.0枚）vs99m Tc硫胶体联合MB双示踪法（2.0枚）（Z=1.457,P=1.000）;MB单示踪法（2.0枚）vs99m Tc硫胶体联合MB双示踪法（2.0枚）（Z=-0.863,P=1.000）;99m Tc硫胶体单示踪法（3.0枚）vs99m Tc硫胶体联合MB双示踪法（2.0枚）（Z=-1.835,P=0.665）。乳头内注射方式条件下SLNB检出成功率比较:ICG联合MB双示踪法、ICG、MB、99m Tc硫胶体单示踪法与99m Tc硫胶体联合MB双示踪法SLNB检出成功率均为100%。结论:大鼠乳头内注射示踪剂寻找SLN具有可行性,与乳晕区皮内注射示踪剂相比,乳头内注射示踪剂SLN检出数目多、SLNB检出成功率等同,是优化的注射部位;乳头可以作为腋窝SLNB示踪剂的注射部位之一;相较于目前指南推荐的蓝色染料联合放射性同位素双示踪法,采用乳头内注射方式条件下ICG联合MB双示踪法、ICG、MB、99m Tc硫胶体单示踪法可以替代99m Tc硫胶体联合MB双示踪法且获得等同SLNB检出效能,示踪剂及组合使用选择灵活,具有一定优势。第二部分中国首仿异硫蓝注射液用于早期乳腺癌患者前哨淋巴结示踪临床评价:一项多中心、单臂、开放性验证试验（CSBr S-024）目的:评价中国首仿异硫蓝注射液在国内早期乳腺癌SLNB的有效性和安全性。方法:五家参与单位筛选满足试验入组条件的早期乳腺癌患者,所有受试患者获得知情同意后进行SLNB手术,手术开始前（≤5min内）于乳晕或者肿物周围皮下（1-3个点）注射中国首仿异硫蓝注射液（总剂量≤3ml）,术中取腋窝横切口切开皮肤显露皮下组织,循蓝染淋巴管走行分离至蓝染淋巴结即为SLN,切除后清点SLN个数并送病理检查,记录示踪淋巴管成功例数（淋巴管示踪成功以临床医生根据术中目测判断为准,判断结果为示踪充分或示踪不充分,示踪充分为示踪成功,术中需要拍照,以说明示踪充分）,病理科切片检查记录切除蓝染SLN个数,根据病理结果选择腋窝淋巴结手术方式。术后随访14±2天,记录不良事件发生情况。有效性以SLN示踪成功率（示踪SLN成功病例数/给予示踪剂的病例数×100%（SLN示踪成功定义为在示踪剂染色下找到≥1枚SLN即为示踪成功））、准确率（示踪剂蓝染且病理切片确认切下的SLN个数/（示踪剂蓝染病理切片确认的SLN个数+病理切片确认为非SLN的个数）×100%）及淋巴管示踪成功率（示踪淋巴管成功病例数/给予示踪剂的病例数×100%）为评价指标,安全性指标通过不良事件、实验室检查、生命体征进行评价。采用SAS（Version 9.4）统计软件进行数据分析,定量指标和计数指标采用描述性统计方法,显著性水平为单侧0.025。结果:基于符合方案集（N=150）分析有效性结果:150例患者中示踪剂染色下找到SLN个数≥1枚的例数为141例,SLN示踪成功率及其95%置信区间（CI）为94.0%（88.9%-97.2%）;示踪淋巴管成功例数为147例,淋巴管示踪成功率及其95%置信区间（CI）为98.0%（94.3%-99.6%）;示踪剂蓝染下检出切下的SLN个数为362个,送检SLN个数为362个,病理切片确认为SLN的个数为382个,病理切片确认为非SLN的个数为16个;SLN示踪准确率及其95%置信区间（CI）为96.0%（93.6%-97.7%）;基于安全性分析集（N=158）分析安全性结果:试验观察期间观察不良事件40例（25.3%）49例次,一般不良事件为37例（23.4%）46例次,多不需处理而自行好转和痊愈,经试验专家组认定一般不良事件与药物使用可能或肯定无关;严重不良事件为3例（1.9%）3例次,经试验专家组认定严重不良事件与药物使用肯定无关,经积极治疗出现良好转归。结论:中国首仿异硫蓝注射液用于国内早期乳腺癌患者SLNB安全有效。第三部分乳腺癌新辅助治疗后前哨淋巴结活检示踪剂应用情况的多中心真实世界研究目的:以新辅助化疗（Neoadjuvant Chemotherapy,NAC）及联合靶向药物治疗代表新辅助治疗（Neoadjuvant Therapy,NAT）,了解国内乳腺癌NAT后行SLNB示踪剂的真实应用情况,探讨影响应用示踪剂行SLNB准确性、假阴性的因素,并与国外指南推荐对比,指出存在的差异并分析原因,并提出改进建议。方法:对自2010年1月1日至2020年12月31日中华医学会外科学分会乳腺学组中20家单位NAC及联合靶向药物治疗后行SLNB和SLNB联合腋窝淋巴结清扫（Axillary lymph node dissection,ALND）的乳腺癌患者示踪剂或组合使用的比例、SLN检出数目进行分类和统计学描述,根据参照美国Louisville大学SLNB评判标准计算示踪剂或组合行SLNB准确率、假阴性率（False negative rate,FNR）,采用卡方检验（必要时应用Fisher精确检验）对可能影响示踪剂应用进行SLNB预测效能（准确性、假阴性）的临床和病理资料进行单因素分析。结果:NAC及联合靶向药物治疗后行SLNB和SLNB联合ALND的乳腺癌患者共计1251例,853例（68.2%,853/1251）使用单示踪法,以应用MB（60.1%,752/1251）为主;398例（31.8%,398/1251）采用双示踪法,以应用MB联合放射性同位素（radioisotope,RI）（18.1%,226/1251）为主,与国内外指南推荐的示踪方式存在一定差异,主要体现在蓝色染料联合RI双示踪法应用率较低,且蓝色染料应用的是MB,而优于MB的异硫蓝或专利蓝在国内尚不可及。5种示踪剂及组合均有＞50%的病例检出大于等于3枚SLNs,符合国内外指南对于NAT后SLNs检出数目要求,在检出SLNs数目方面均可保证评估腋窝状况的准确性并降低假阴性。使用MB单示踪法时检出4枚SLNs病例数最多（27.1%,204/752）,SLNB准确率为93.7%,FNR为9.7%,单因素分析显示NAT前区域淋巴结分期、分子分型是影响使用MB单示踪法进行SLNB预测效能的临床病理因素。使用纳米炭单示踪法时检出5枚SLNs病例数最多（43.6%,44/101）,SLNB准确率为84.7%,FNR为26.3%,单因素分析显示NAT前乳腺癌原发病灶临床分期、NAT前区域淋巴结分期、组织学类型、NAT方案及乳腺癌病灶p CR情况是影响使用纳米炭单示踪法进行SLNB预测效能的临床病理因素。使用MB联合放射性同位素双示踪法时检出4枚SLNs病例数最多（24.8%,56/226）,SLNB准确率为94.3%,FNR为9.3%,单因素分析显示组织学类型是影响使用MB联合RI双示踪法进行SLNB预测效能的临床病理因素。使用MB联合吲哚菁绿（Indocyanine Green,ICG）双示踪法时检出2枚SLNs病例数最多（27.4%,20/73）,SLNB准确率为79.2%,FNR为26.3%,单因素分析未发现影响使用MB联合ICG双示踪法进行SLNB预测效能的临床病理因素。使用MB联合纳米炭双示踪法时检出3枚SLN病例数最多（30.3%,30/99）,SLNB准确率为98.1%,FNR为8.1%,单因素分析显示NAT前乳腺癌原发病灶临床分期是影响使用MB联合纳米炭双示踪法进行SLNB预测效能的临床病理因素,组织学类型是否影响使用MB联合纳米炭双示踪法进行SLNB预测效能未能行单因素分析。结论:中国乳腺癌NAT后SLNB以MB单示踪法为主,限制了NAT后BC患者SLNB的普及开展,双示踪法中以MB联合RI为主,MB联合RI双示踪法进行SLNB的预测效能优于单一使用MB;纳米炭单示踪法、MB联合ICG和MB联合纳米炭双示踪法在NAT后SLNB中目前应用的临床证据不充分,有待进一步研究。