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各种原因造成的关节软骨缺损尤其是大面积软骨缺损的修复一直是关节外科研究的重点,利用组织工程化人工软骨修复是其发展的必然趋势。由于大多数软骨组织工程材料,尤其是人工合成高分子材料常常亲水性差,细胞吸附率弱,细胞难以与材料发生相互作用,因此,研究如何提高细胞在材料上的粘附、促进细胞的增殖及功能表达成为研究的焦点。本实验研究目的:在立体状态下,检测天然可吸收材料Ⅱ型胶原与人工可吸收材料PLGA对经诱导的MSC粘附作用和向软骨细胞分化的能力。材料和方法实验采用河南省实验动物中心提供4-8周龄、雌或雄性新西兰白兔,抽取新西兰白兔双测股骨骨髓,分离骨髓间充质干细胞(MSCs),以含胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor Ⅰ,IGF-Ⅰ)及转化生长因子(transforming growth factor beta 3,TGF-β3)的无血清F-12培养基诱导培养。取2周后MSCs,接种于24孔培养板,其中Ⅱ型胶原修饰PLGA材料的12孔为实验组,对照组为单纯PLGA材料的另12孔。1.采用RT-PCR观察骨髓间充质干细胞是否向软骨细胞方向分化,是否表达软骨细胞特有的表达产物Ⅱ型胶原。2.细胞计数检测细胞粘附情况。3.免疫组化检测单纯PLGA材料和包被Ⅱ型胶原的PLGA材料,其表面生长的郑州大学2004届硕士研究生毕业论文H型胶原与PLGA对诱导后骨髓间充质干细胞粘附及分化经诱导后的间充质干细胞的11型胶原的表达。4.MTT法检测细胞在胶原组与对照组的细胞存活、增殖情况,从而检测细胞生长、粘附及分化情况。5数据采用统计工具SPSS10.O统计分析软件。统计方法采用xZ检验或精确概率法和方差分析,取Q二0.05为显著性检验水准对资料进行分析。结果:1.用四表格法确切概率法比较实验组(培养液含生长因子)与对照组(培养液中不含生长因子)11型前胶原mRNA的阳性表达率,实验组和对照组差异有非常显著性(P(0.01)。2.细胞接种后2、4、6、8h各组细胞数经统计学处理表明,第6、8h实验组和对照组差异有非常显著性(P<0.01)。3.细胞免疫组化检测单纯PLGA材料和包被后PLGA材料表面生长的诱导后的间充质干细胞的n型胶原的表达结果。PLGA组在第30天时,n型胶原免疫组化染色,显色辉度降低,绝大多数为阴性;包被11型胶原PLGA组在30天时,H型胶原仍保持强阳性。实验组和对照组差异有非常显著性(P<0.01)。4.MTT法测细胞在有胶原组与对照组的细胞存活、增殖情况结果显示:第1,2,3周时,PLGA组比包被11型胶原PLGA组在细胞增殖上,差异有显著性(P(0 .05)。结论:1骨髓间充质干细胞经诱导后可向软骨细胞方向分化,并表达软骨细胞特有的表达产物n型胶原。2.在包被n型胶原PLGA组间充质干细胞粘附能力强,增殖能力强,且持续表达软骨细胞特有表型11型胶原,所以11型胶原能促进经诱导的MSC在PLGA上粘附、增殖并维持软骨细胞表型。所以它所提供的三维立体结构有利于细胞生长。