论文部分内容阅读
目的：本实验以国家自然科学基金资助项目（编号：81072838）为依托进行设计。在中医学“情志学说”理论基础上，结合现代医学“心理应激理论”，以体外培养的人子宫肌瘤平滑肌细胞（ULM细胞）为研究对象，基于课题组前期应用去甲肾上腺素（Norepinephrine，NE）、肾上腺素（Epinephrine，E）、异丙肾上腺素（Isoproterenol，ISO）作用于体外培养的人子宫肌瘤平滑肌细胞，证实神经递质与ULM细胞血管内皮生长因子（Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）、成纤维细胞生长因子（Fibroblastgrowthfactor，FGF）表达有明显相关性的基础上，进一步研究NE及其拮抗剂酚妥拉明对ULM细胞生长的影响。探讨肝郁－心理应激通过激活交感－肾上腺髓质系统(Sympathetico-adrenomedullarysystem，SAS)，产生去甲肾上腺素（Norepinephrine，NE）等神经递质，激活ULM细胞肾上腺素能受体（Α-drenergicReceptor，AR）信号转导途径：AR－cAMP－PKA信号转导通路，促进ULM细胞VEGF及FGF表达的作用机制，揭示肝郁－心理应激在ULM发病中的重要作用。为临床从肝郁－心理应激角度防治ULM提供新的思路和方法，并为中医学“情志学说”提供新的理论依据。 方法：采用胶原酶消化法对人ULM细胞进行原代培养，经HE及免疫组化染色法进行细胞学鉴定。将培养的ULM细胞分为3组：A.对照组；B.NE组；C.NE+酚妥拉明组；除Α组外，B组和C组于培养液中分别添加NE1μmol/L，C组另加酚妥拉明1μmol/L预培养1h。三组细胞干预12h后收集。应用竞争性酶联免疫吸附法（ELISA法）检测细胞培养液中VEGF、FGF的蛋白表达；采用125I-cAMP放免法检测各组cAMP的含量表达；采用WesternBlot方法检测各组细胞PKA蛋白的表达。 结果： 1．成功培养了ULM细胞，并经HE染色及免疫细胞化学鉴定证实。 2．各组ULM细胞培养液中VEGF蛋白表达比较 NE组与NE+酚妥拉明组ULM细胞中VEGF蛋白表达值高于对照组，差异有显著性（P<0.05）。 NE组ULM细胞中VEGF蛋白表达值高于NE+酚妥拉明组，差异有显著性（P<0.05）。 3．各组ULM细胞培养液中FGF蛋白表达比较 NE组ULM细胞中FGF蛋白表达值高于空白组，差异有显著性（P<0.05） NE+酚妥拉明组ULM细胞中FGF蛋白表达值低于对照组，但无显著性差异（P>0.05）。 NE组ULM细胞中FGF蛋白表达值高于NE+酚妥拉明组，差异有统计学意义（P<0.05）。 4．各组ULM细胞cAMP蛋白表达比较 NE组cAMP蛋白表达值明显低于对照组，差异有显著性（P<0.05）。 NE+酚妥拉明组cAMP蛋白表达值高于对照组，但无显著性差异（P>0.05）。 NE组cAMP蛋白表达值明显低于NE+酚妥拉明组，差异无显著性（P<0.05）。 5．各组ULM细胞培养液中PKA蛋白表达比较 NE组与NE+酚妥拉明组PKA蛋白表达值明显均低于对照组，差异有显著性（P<0.05）。 NE组PKA蛋白表达平均测量值低于NE+酚妥拉明组（P=0.000），差异有显著性。 结论： 实验结果表明NE可以上调人ULM细胞中VEGF、FGF蛋白表达水平，降低细胞内cAMP、PKA的表达水平，因此本课题组推测：肝郁－心理应激可能通过兴奋交感－肾上腺髓质系统，刺激神经递质NE的释放，通过激活ULM细胞AR-cAMP-PKA信号转导通路，上调细胞因子VEGF、FGF的表达水平，促进子宫肌瘤细胞的增殖，最终导致子宫肌瘤的发生。