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目的:本实验以国家自然科学基金资助项目(编号:81072838)为依托进行设计。在中医学“情志学说”理论基础上,结合现代医学“心理应激理论”,以体外培养的人子宫肌瘤平滑肌细胞(ULM细胞)为研究对象,基于课题组前期应用去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)、肾上腺素(Epinephrine,E)、异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)作用于体外培养的人子宫肌瘤平滑肌细胞,证实神经递质与ULM细胞血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、成纤维细胞生长因子(Fibroblastgrowthfactor,FGF)表达有明显相关性的基础上,进一步研究NE及其拮抗剂酚妥拉明对ULM细胞生长的影响。探讨肝郁-心理应激通过激活交感-肾上腺髓质系统(Sympathetico-adrenomedullarysystem,SAS),产生去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)等神经递质,激活ULM细胞肾上腺素能受体(Α-drenergicReceptor,AR)信号转导途径:AR-cAMP-PKA信号转导通路,促进ULM细胞VEGF及FGF表达的作用机制,揭示肝郁-心理应激在ULM发病中的重要作用。为临床从肝郁-心理应激角度防治ULM提供新的思路和方法,并为中医学“情志学说”提供新的理论依据。 方法:采用胶原酶消化法对人ULM细胞进行原代培养,经HE及免疫组化染色法进行细胞学鉴定。将培养的ULM细胞分为3组:A.对照组;B.NE组;C.NE+酚妥拉明组;除Α组外,B组和C组于培养液中分别添加NE1μmol/L,C组另加酚妥拉明1μmol/L预培养1h。三组细胞干预12h后收集。应用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA法)检测细胞培养液中VEGF、FGF的蛋白表达;采用125I-cAMP放免法检测各组cAMP的含量表达;采用WesternBlot方法检测各组细胞PKA蛋白的表达。 结果: 1.成功培养了ULM细胞,并经HE染色及免疫细胞化学鉴定证实。 2.各组ULM细胞培养液中VEGF蛋白表达比较 NE组与NE+酚妥拉明组ULM细胞中VEGF蛋白表达值高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。 NE组ULM细胞中VEGF蛋白表达值高于NE+酚妥拉明组,差异有显著性(P<0.05)。 3.各组ULM细胞培养液中FGF蛋白表达比较 NE组ULM细胞中FGF蛋白表达值高于空白组,差异有显著性(P<0.05) NE+酚妥拉明组ULM细胞中FGF蛋白表达值低于对照组,但无显著性差异(P>0.05)。 NE组ULM细胞中FGF蛋白表达值高于NE+酚妥拉明组,差异有统计学意义(P<0.05)。 4.各组ULM细胞cAMP蛋白表达比较 NE组cAMP蛋白表达值明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。 NE+酚妥拉明组cAMP蛋白表达值高于对照组,但无显著性差异(P>0.05)。 NE组cAMP蛋白表达值明显低于NE+酚妥拉明组,差异无显著性(P<0.05)。 5.各组ULM细胞培养液中PKA蛋白表达比较 NE组与NE+酚妥拉明组PKA蛋白表达值明显均低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。 NE组PKA蛋白表达平均测量值低于NE+酚妥拉明组(P=0.000),差异有显著性。 结论: 实验结果表明NE可以上调人ULM细胞中VEGF、FGF蛋白表达水平,降低细胞内cAMP、PKA的表达水平,因此本课题组推测:肝郁-心理应激可能通过兴奋交感-肾上腺髓质系统,刺激神经递质NE的释放,通过激活ULM细胞AR-cAMP-PKA信号转导通路,上调细胞因子VEGF、FGF的表达水平,促进子宫肌瘤细胞的增殖,最终导致子宫肌瘤的发生。