研究背景慢性肾脏病是一个世界性的公共卫生问题。糖尿病肾病是导致慢性肾脏病和终末期肾病的主要因素。据预测,到2040年,年龄在20-79岁之间的糖尿病患者将增加到6.42亿,其中30-40%将发展为糖尿病肾病。因此,任何能够延缓或者阻止糖尿病肾病发展的策略都具备极其重要的社会和经济意义。NLRP3（NOD,LRR-an-d pyrin domain-containing protein 3）是细胞内感受器,可感受大量的代谢信号,从而导致NLRP3炎症小体的形成和激活。NLRP3炎症小体的组装诱导Caspase-1依赖性细胞因子IL-1β和IL-18的释放,导致糖尿病肾脏的促炎症级联反应。因此,揭示NLRP3炎症小体激活的机制可能为糖尿病肾病的肾脏炎症治疗提供新的靶点。MicroRNAs是一类由内源性基因编码的非编码单链RNA,通过转录后调控抑制特定靶基因的蛋白表达。组织特异性非编码RNA在生理和病理过程中发挥关键作用。已有的研究显示microRNAs参与多种肾脏疾病的发生发展,但是肾脏特异性microRNAs在糖尿病肾病中的作用尚未明确。研究方法1.通过原位杂交、实时荧光定量PCR和细胞荧光原位杂交检测microRNA-10在组织或者器官的特异性表达以及细胞定位。2.建立链脲佐菌素（STZ）诱导和db/db小鼠两种糖尿病肾病模型,通过原位杂交、免疫组织化学和Western blot检测肾内microRNA-10、NLRP3蛋白和炎症细胞的表达,以及microRNA-10与NLRP3蛋白表达的关系。3.利用生物信息软件分析NLRP3 mRNA3’-非翻译区是否存在microRNA-10的结合位点。4.荧光素酶报告检测microRNA-10是否与人NLRP3 mRNA3’-非翻译区结合。5.在细胞培养模型中,利用CRISPR-Cas 9技术特异性敲除细胞的microRNA-10,在体外观察microRNA-10对NLRP3炎症小体信号的调节作用。6.在糖尿病肾病小鼠模型中,通过慢病毒载体原位抑制、过表达或者恢复microRNA-10表达,在体内验证microRNA-10通过调控NLRP3炎症小体对糖尿病肾病肾脏炎症的作用。7.在糖尿病肾病患者的肾活检标本中,通过原位杂交和免疫组织化学检测microRNA-10和NLRP3蛋白表达、巨噬细胞浸润情况,分析microRNA-10与肾脏炎症的相关关系。研究结果在本研究中,我们发现了一个保守且在肾脏特异性富集的microRNA——microRNA-10（包括 2 个成员,miR-10a 和 miR-10b）。microRNA-10 主要表达于肾小管上皮细胞和肾小球足细胞的细胞质。在糖尿病肾病小鼠和糖尿病肾病患者的肾脏中均发现microRNA-10表达下调,这与NLRP3炎症小体的激活呈负相关。我们还发现,microRNA-10通过与NLRP3 mRNA的3’-非翻译区结合,阻断其转录后翻译,负向调控NLRP3炎症小体信号的激活,减少Caspase-1剪切体形成和IL-1β的成熟,进而减轻糖尿病肾脏炎症。研究结论我们发现了在肾脏特异性富集的microRNA-10通过抑制肾脏NLRP3炎症小体的激活减轻糖尿病肾病的肾脏炎症。这些发现为糖尿病肾病的肾脏炎症治疗提供了新靶点。