目的：研究表皮生长因子（EGF）在临床大肠癌组织中表达及意义；探讨EGF基因多态性与大肠癌发病的相关性；揭示抑制EGF基因表达对大肠癌细胞的生长增殖作用及机制。方法：通过免疫组化的方法检测分析临床大肠癌病理标本中EGF的表达。选取50名大肠癌患者病理组织标本，结肠癌31例，直肠癌19例。高分化腺癌为12例，中分化腺癌为29例，低分化腺癌为9例。依据TNM分期分类，Ⅰ期9例，Ⅱ期16例，Ⅲ期17例，Ⅳ期8例。对照组选取标本边缘正常大肠组织。所有标本切片后采用免疫组化方法染色，细胞浆和/或细胞膜如果呈现棕黄色染色颗粒则设定细胞EGF染色阳性。每张切片均有两位病理医师观察，采用双盲法，每张切片随机选择10个视野用400倍显微镜观察。积分分级法记录染色结果。染色强度:染色无色0分，染色浅黄色评定为l分，染色棕黄色评定为2分，染色棕褐色评定为3分。阳性细胞数:无阳性染色细胞评定为0分，阳性染色细胞数25%评定为1分，阳性染色细胞数26-50%评定为2分，阳性染色细胞数51-75%评定为3分，阳性染色细胞数>75%评定为4分。染色积分为上述两项之和，标本染色分级如下：（－）为阳性细胞数0分，（±）为阳性细胞数2-3分，（＋）为阳性细胞数4-5分，（＋＋）为阳性细胞数6-7分，其中染色阳性为（＋）和（＋＋）的标本。验证其表达情况。同时，对大肠癌组织中EGF表达情况与临床指标关系进行研究，进行统计学处理，两组间对比应用χ2检验，P<0.05有统计学意义。利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术研究EGF基因多态性。检验180名大肠癌患者EGF基因型，病例组年龄区间为35-84岁，平均年龄60.8岁，其中女性患者85名，男性患者95名。对照组年龄区间为55-65岁，平均年龄61岁，其中女性患者87名，研究EGF+61GG基因型与大肠癌的关系。所有病人抽静脉血，提取DNA经PCR扩增后，使用限制性内切酶AluI酶切，将酶切后产物进行琼脂糖凝胶电泳，统计患者EGF+61位点基因型，研究所有大肠癌患者EGF+61基因多态性分布状况。利用RNAi技术探讨EGF的缺失对大肠癌细胞生长增殖的影响。查询EGFmRNA核苷酸序列，通过软件设计针对EGF的siRNA，通过化学合成的方法合成三条GF-siRNA，通过Lipofectamine2000质粒转染到培养好的SW620大肠癌细胞中，利用羧基荧光素（FAM）检测转染效率，再通过RT-PCR研究EGF-siRNA对SW620大肠癌细胞EGF基因表达的影响，提取转染后的大肠癌细胞中RNA,通过SuperScript II反转录酶作用转换成DNA，将所得的DNA进行PCR扩增并电泳，选择沉默EGF基因效果最好的EGF-siRNA，采用MTT法研究SW620大肠癌细胞EGF基因受到干扰后，细胞生长受抑的情况，在一定数量的细胞中，产生的蓝紫色针状结晶与细胞的数量几乎成正比。因此，MTT试验测得的OD值与细胞数成正比。可以通过吸光值来计算细胞的数量。mRNA受到抑制可导致细胞数量增长减缓。，通过吸光值可以间接计算细胞生长抑制率=（1－实验组A490nm/对照组A490nm）×100%，并根据结果绘制生长曲线。不同处理组细胞经48小时培养后，常规消化收集细胞，Annexin V和PI染液室温共孵育30min，流式细胞学检测，CellQuest软件分析荧光强度。结果：表皮生长因子（EGF）在临床大肠癌组织中呈高表达，并与大肠癌组织分化、分期及转移存在关联性。EGF在大肠癌细胞中表达主要集中于细胞的细胞浆和（或）细胞核中，EGF染色表现为黄色的片状染色区域。所检测的50例大肠癌患者的肿瘤组织中有27例EGF染色阳性（54.00%）;50例对照组癌旁粘膜中仅有5例EGF染色阳性（10.00%）。数据经统计学处理后如下：EGF在大肠癌肿瘤细胞中的表达水平明显强于其在癌旁粘膜细胞中的表达（P<0.05）。EGF在肿瘤组织中的表达与肿瘤的分化程度存在关联，实验中男患者EGF染色阳性率为57%，女患者EGF染色阳性率为53%；年龄50岁以上的（包括50岁）患者EGF染色阳性率为54.84%，50岁以上的患者EGF染色阳性率为56.25%；这些分类方法中各组之间比较无统计学差异（P>0.05）。以TNM分期分组，Ⅰ期为33.33%、Ⅱ期为43.75%、Ⅲ期为58.82%、Ⅳ期为75%，但是将Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ、Ⅳ比较有统计学差异（P <0.05）；EGF染色阳性率与肿瘤分化有相关性，根据分化程度分类，高分化组为25%、中分化组为62.07%、低分化组为77.78%，其中EGF染色阳性率在高分化组与中分化两组之间比较有统计学差异（P <0.05），而在中分化组与低分化两组之间比较无统计学差异（P>0.05）。通过PCR-RFLP方法，发现EGF+61GG基因型与大肠癌发病存在相关性。大肠癌患者EGF+61GG基因型显著高于对照组（OR=1.93,95%可信区间（CI）=1.07,3.50；p=0.03），EGF+61GG基因型的中国人群患大肠癌的几率比EGF+61AG或EGF+61AA的人群高，通过分层分析大肠癌患者肿瘤部位、大小、生长形态、分化、TNM分期等大肠癌临床指标与EGF+61无统计学相关性。选用大肠癌SW620细胞作为EGF表达强度与大肠癌细胞生长增殖相关性研究的体外细胞模型，利用EGF-siRNA干扰或下调EGF，通过MTT实验证实，在EGF-siRNA3转染SW620细胞后，与对照组和转染组相比较，在转染后48小时至96小时，观察到EGF-siRNA3组细胞数量的明显减少，此结果证实EGF-siRNA可以明显抑制SW620细胞生长增殖，且EGF-siRNA在转染后48细胞开始发挥生长增殖抑制的作用并可延长至转染后96小时。另外，在96小时的时间点上，EGF-siRNA的转染增强SW620细胞增殖抑制。应用Annexin V与PI双染色结果显示：实验组细胞和对照组/转染组比较，Annexin V+PI-百分比明显增高，此结果提示EGF-siRNA3诱导细胞凋亡，即下调或干扰EGF抑制SW620细胞增殖的重要机制为凋亡诱导。结论：EGF的表达与大肠癌的发生发展呈正相关；而EGF+61GG基因型是诊断大肠癌的潜在性指标；下调EGF可通过诱导凋亡的方式引起大肠癌细胞增殖抑制。