丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染所引起的丙型肝炎呈全球性分布。据WHO估计，目前全世界约有1.8亿HCV感染者，且呈增长趋势。HCV感染所致的丙型肝炎慢性化率高达75％-85％，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对人类的健康和生命构成严重威胁。 目前对于HCV持续感染及导致慢性肝疾病的机理仍不十分清楚。蛋白质组学研究技术和方法的出现为我们从蛋白质整体水平探讨HCV的致病机理及丙型肝炎慢性化机制提供了很好的思路。蛋白质组是指由一个基因组(genome)，或一个细胞、组织表达的所有蛋白质(protein)。它是对应于一个基因组的所有蛋白质构成的整体，而不是局限于一个或几个蛋白质。蛋白质组学(proteomics)以蛋白质为研究对象，分析细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，在整体水平上揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。 HCV无逆转录酶活性，只在细胞胞浆内复制，不能与宿主基因整合，主要通过其表达的蛋白质起作用。核心蛋白(core)是HCV多聚蛋白前体经细胞信号肽酶剪切而产生的非糖基化蛋白，由191个氨基酸组成。该蛋白的氨基酸序列十分保守，具有调控多种细胞基因，影响细胞生长、增生及凋亡的能力。近年来外国学者在感染HCV的患者血清中发现了HCV-F蛋白，是由HCV核心基因编码的另一个产物，它是由核心基因密码子核苷酸移位后产生的。其在HCV不同基因型的高度保守性和在患者体内抗体的存在，提示F蛋白在HCV生命周期中起重要作用。 第一部分HCV患者外周血单个核细胞蛋白质表达质谱分析分别分离丙型肝炎患者和健康供血者的外周血单个核细胞(PBMCs)，制备蛋白样品并用BradFord法定量。应用固相化pH梯度双向凝胶电泳(2-DE)分离健康者(10)及HCV患者(28)PBMCs的总蛋白质，凝胶银染显色后，用PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱(PMF)，通过SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。得到两张2-DE图谱，HCV患者及健康者PBMCs凝胶的蛋白质点数分别为625及614；初步筛选出HCV患者与健康者存在明显差异的12个蛋白点，经质谱分析，初步鉴定了10种蛋白质。这些差异蛋白质包括病毒蛋白、蛋白质合成与分解、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号转导相关蛋白质，为研究丙型肝炎慢性化机制提供了新的线索。 　　第二部分HCV-F基因在hepG2细胞中的表达以及对PI3K的影响根据Genbank提供的HCV 1b型序列设计引物，应用PCR技术从含有HCV全长开放阅读框的质粒中获得HCV-F基因片段。PCR产物经过纯化后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切，电泳回收后与用上述限制性内切酶双酶切后电泳回收的pcDNA3.0(-)质粒连接，获得的重组质粒(pcDNA3.0-F)转化大肠杆菌TG1感受态细胞。通过酶切、PCR及测序鉴定，HCV-F基因已正确插入到pcDNA3.0(-)中，再利用脂质体转染HepG2细胞。经RT-PCR及Western blot检测，HCV的F基因在HepG2细胞中获得稳定表达，并且在转染HepG2细胞中，检测到P13K蛋白的高表达。实验结果表明，HCV-F可在体外激P13K及其信号通路，提示其可能与HCV的致病机制有关。