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番石榴叶提取物具有良好的降血糖作用,在民间广泛用于糖尿病治疗,但其化学成分复杂,且其降血糖作用机制尚未阐明。本论文通过优化提取条件并利用GC-MS分析结合分子量比对,建立全面快速识别番石榴叶挥发性成分的分析方法。通过QuEChERS方法优化了番石榴叶中熊果酸和齐墩果酸的富集条件,建立番石榴叶中两种成分的HPLC分析方法。通过分析番石榴叶提取物干预下2型糖尿病大鼠血浆的氨基酸代谢谱的变化,并结合药效学结果进行相关性分析,探讨番石榴叶提取物治疗2型糖尿病的作用途径和分子机制,为今后糖尿病的预测以及治疗糖尿病新药的研发提供实验和理论根据。本文主要分为以下几个方面:(一)通过GC-MS技术,建立一种全面快速分析番石榴叶挥发性成分的分析方法。通过水蒸气蒸馏提取技术从番石榴叶中提取挥发性成分,利用NIST谱图库和HP-5色谱柱的GC保留指数对挥发性化合物进行鉴定,共鉴别出27种化合物,通过面积归一化法来测定各个化合物的相对质量分数。得到的挥发性成分中,大部分为倍半萜类化合物,如 α-石竹烯(α-copaene)、石竹烯(caryophyllene)、香橙烯(aromadendrene)、α-杜松烯(α-cadinene)、去氢白菖烯(calamenene)等。(二)通过优化QuEChERS前处理技术,使番石榴叶中活性成分熊果酸和齐墩果酸得到富集,建立番石榴叶中两种成分的HPLC分析方法。在分析条件下,UA和OA在1-320μg/mL(r>0.999)范围内线性关系良好,UA和OA的检测限分别为0.18和0.36μg/mL,日间和日内精密度分别低于1.95和2.55%,回收率范围为97.4-111.4%,番石榴叶中UA和OA的含量分别为2.5和0.73 mg/g。与以往文献使用超声辅助萃取,微波辅助萃取,溶剂加速萃取等方法相比,本法具有耗时减少,提取效率提高,有机溶剂使用量减少,更绿色,简便等特点。(三)应用4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑(NBD-F)对氨基酸进行衍生化,结合HPLC-UV进行定量分析,建立大鼠血浆中21种氨基酸的色谱分析方法。线性相关系数均大于0.99,日内精密度(n=5)为0.88-6.19%,日间精密度(n=5)为2.01-6.81%。检测限的范围是0.0177-0.2286 μmol/L,定量限的范围是0.0593-0.7619 μmol/L,加样回收率90.23%-115.65%。大鼠血浆中各氨基酸浓度在34.40-486.09 μmol/L之间。该分析方法操作简便,灵敏度高,分离效果好,可用于大鼠血浆中氨基酸浓度的检测。(四)建立2型糖尿病大鼠模型,采用三种不同番石榴叶提取物剂量及阳性对照药格列吡嗪对T2DM大鼠进行药物干预实验,研究发现,番石榴叶提取物对T2DM大鼠的空腹血糖、血脂水平及T2DM大鼠的糖耐量异常均有改善作用。当番石榴叶提取物剂量为1200 mg/kg时,对T2DM大鼠高血糖,血脂及糖耐量改善作用最为显著。基于给药第10、20、28天时大鼠的血浆氨基酸代谢谱,对数据进行PCA、OPLS-DA建模,寻找差异代谢物,并通过MetaboAnalyst 3.0数据库分析相关的代谢通路,从而解析番石榴叶提取物的降血糖作用机制。