河北省部分地区5种鸡呼吸道病毒检测及多重PCR方法建立

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畜牧业是河北省农业经济的支柱产业之一,近年来河北省鸡存栏量位于全国前三位。病毒性疾病可给养鸡业带来巨大的经济损失,而呼吸道相关病毒经常被认为是引发家禽发病的主要或次要病原体。为给河北省鸡呼吸道病毒病的防控提供参考,本研究拟对2019-2020年河北省部分地区患呼吸道疾病的鸡群进行禽流感病毒(Avian influenza virues,AIV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)、传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)和禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus,aMPV)等五种病毒的流行病学调查;对部分阳性病料进行病毒分离、鉴定、对分离毒相关基因进行遗传变异分析;建立一种针对5种鸡呼吸道病毒的多重PCR检测方法。对2019年-2020年自河北省部分地区患呼吸道病鸡群采集的131份病料分别检测AIV、aMPV、NDV、ILTV和IBV,结果显示,阳性样品共44份,总阳性率为 33.59%(44/131),其中 AIV、ILTV、IBV、NDV 和 aMPV 的阳性率分别为17.56%(23/131)、10.69%(14/131)、7.63%(10/131)、0%(0/131)、0%(0/131);存在AIV与ILTV和AIV与IBV的混合感染;AIV和ILTV在四季均有检出;IBV仅在夏、秋、冬三季检出。从131份病料中分离纯化到4株H9N2亚型AIV、4株IBV和8株ILTV。遗传进化分析结果表明,4株H9N2亚型AIV分离毒的HA基因均属于近年流行的h9.4.2.5分支,NA基因属于Y280-like分支;HA基因和NA基因均与疫苗毒的遗传距离较远;HA蛋白裂解位点模式均为PSRSSR ↓ GLF,受体结合位点均存在具有公共卫生意义的Q234L突变。4株IBV分离毒M基因具有三种不同长度:678bp、681bp、693bp,分别属于LDT3(1株)和Tc07-2(3株)两种基因型,4株IBV分离毒均与我国疫苗毒H120、M41和4/91株遗传距离较远。8株ILTV分离毒ICP4基因之间同源性较高,ICP4基因片段1缺失12bp碱基,表明8株分离毒均不属于TCO疫苗毒。本研究建立了一种可同时检测AIV、aMPV、NDV、ILTV和IBV的多重PCR检测方法,其最低检测限为1 × 103copies/μL,检测灵敏度较高,对ChPV、ANV、AstV、ARV、FAdV 5种病毒无特异性扩增,重复性实验结果一致。综上所述,近期河北省部分地区患呼吸道疾病鸡群中存在AIV、ILTV和IBV的感染,建立的多重PCR检测方法可为鸡5种呼吸道病毒的快速检测提供参考。
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