仙台病毒(Sendai virus,SeV)属于副粘病毒科副粘病毒属,是一个单股负链RNA病毒,小鼠、大鼠、仓鼠和豚鼠等啮齿类实验动物均易感。仙台病毒传染性强、易扩散,一般呈隐性感染,是啮齿类实验动物最难控制的病毒之一,鼠群感染仙台病毒后会改变体内细胞免疫反应,干扰试验结果,因此建立快速诊断方法十分必要。目前,检测仙台病毒主要用酶联免疫吸附法(ELISA)检测仙台病毒抗体,SeV可以在LLCMK2和BHK21细胞上生长,但很难获得高滴度的病毒,鸡胚培养虽然能获得高滴度的病毒,但纯化的病毒粒子保留有鸡胚蛋白,干扰检测的特异性。本研究利用大肠杆菌表达系统pQE31表达仙台病毒F蛋白高抗原部分FP(S),用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立ELISA方法,可用于仙台病毒血清抗体的快速检测。1仙台病毒FP(S)基因的克隆、表达及抗原制备根据已发表的SeV(gi:9627219)F基因序列设计特异性引物,以逆转录的仙台病毒cDNA为模板,用RT-PCR方法扩增出F基因高抗原性片段FP(S),将其插入到pMD18-T载体中测序鉴定后,测序正确的FP(S)基因片段克隆入pQE31原核表达载体中,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达,纯化重组蛋白FP(S)。用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行验证,结果表明,表达的融合蛋白FP(S)分子量为26kD,与预期大小相符,能与SeV阳性血清发生特异性反应,说明FP(S)有很高的抗原性,可以作为检测仙台病毒血清抗体的抗原。2检测仙台病毒抗体的间接ELISA检测方法的建立及应用用pQE31表达的仙台病毒融合蛋白FP(S)免疫6周龄BALB/c小鼠,免疫5次后收集血清,以融合蛋白FP(S)为包被抗原,免疫鼠血清为阳性抗体,建立检测仙台病毒抗体的间接ELISA方法,结果表明建立的间接ELISA方法有很好的特异性、敏感性,可用于仙台病毒的抗体的快速检测。