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结直肠癌在全世界范围内发病率一直呈不断上升的趋势,已严重影响着人类的身心健康,结直肠癌中约70%为散发性结直肠癌,使得人们更加关注散发性结直肠癌的发生机制。由于散发性结直肠癌发病早期不易发现,且预后差、易发生转移等问题,目前已报道的散发性结直肠癌分子标识较少,因此,急需在全基因组范围内寻找新的能够进行早期诊断的散发性结直肠癌的遗传标志物。本课题前期已经通过全基因组外显子测序及相关文献查询筛选出可能作为散发性结直肠癌的候选基因DDI2。DDI2 (DNA-damage inducible 1 homolog 2)即DNA损伤诱导的同源物2,其在甲状腺癌中表达降低,而在散发性结直肠癌的研究并未见报道。实验通过Western Blot和RT-PCR (real time PCR)分析DDI2基因在结直肠癌细胞系Lovo、HT-29、colo320、sw480细胞系及正常细胞系NCM460中的表达情况；同时构建DDI2基因的野生型和突变型表达载体(pIRES2、pCDNA3.1、pEGFP-C2),通过DDI2基因表达载体转染结直肠癌HT-29细胞系来研究DDI2基因对肿瘤细胞增殖和迁移的影响,为进一步研究DDI2基因对散发性结直肠癌的发生发展的影响奠定基础。Western Blot实验结果显示,DDI2基因在细胞系NCM460、colo320、sw480、Lovo和HT-29中的表达量均很少,差异不显著,但在RT-PCR实验中,DDI2基因的mRNA在上述结直肠癌细胞系中均有表达,且与正常的肠细胞系NCM460有差异显著。与转染空载体的HT-29细胞相比,携带野生型DDI2基因pIRES2载体的HT-29细胞,在细胞的增殖速度、克隆形成数、迁移速度方面明显降低且有显著性(P<0.05)。结论：DDI2基因表达产物抑制结直肠癌HT-29细胞系的增殖和迁移。提示DDI2基因很有可能参与到散发性结直肠癌的发生过程中。结直肠癌是目前研究发现重要的恶性肿瘤之一,已严重影响着人们的生活和健康。由于结直肠癌早期不易发现、易转移、治愈率差等原因,因此需要一种新的方法寻找结直肠癌疾病风险预警的遗传标志物显得特别重要。目前发现微小RNA (microRNA, miRNA)可能通过与靶基因的非编码区特异调控靶基因的表达水平。而肿瘤相关基因3’UTR区域的多态性可能通过影响miRNA与特异位点结合而最终影响肿瘤的发生与发展。目前,关于结直肠癌相关基因3’UTR的多态性与相关基因表达量的关系尚未被深入研究。本课题通过查阅相关文献,并用RegRNA. RNAhybrid等网站进行筛选,分析候选基因的3’UTR的多态性位点与miRNA的结合方式,发现仅TGFBR2基因3’UTR的rs11466537位点与hsa-miR-1193结合紧密,因此选择TGFBR2基因的rs11466537位点为研究对象。构建TGFBR2基因rs11466537位点上下游约300 bp的野生型和突变型载体pmirGLO,转染至hela细胞,通过双荧光素酶分析方法检测荧光值。研究结果显示,相比转染了突变型表达载体的细胞系,含T碱基的野生型表达载体的细胞系的双荧光素酶活力明显下降(P<0.001)。结论：TGFBR2的3’UTR的rs11466537位点突变与hsa-miR-1193结合影响TGFBR2基因的表达,该结果为进一步研究TGFBR2基因表达调控结直肠癌发生发展提供实验依据。