结核分枝杆菌MarR家族蛋白Rv0880结构的初步研究

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结核病是一种最高可致死的由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染引起的慢性呼吸道传染疾病。近年来,由于抗结核药物的不合理使用,耐药菌株出现的比率逐年增加,因此,研究M.tb耐药的分子机制成为治疗结核病的重要战略。MarR家族蛋白是一类多重抗生素耐药性调控蛋白,对其的研究在M.tb中未见报道。水杨酸作为MarR家族蛋白的一种典型配体能与该家族中的多种蛋白结合。此外,水杨酸盐还能引起M.tb对多种抗结核药敏感性降低,但具体机制不十分清楚。据此,我们推测MarR家族蛋白在水杨酸引起的M.tb耐药中发挥一定作用。故本研究选取M.tbMarR家族蛋白Rv0880为研究对象,对其结构做了初步研究:提取了M.tb标准毒株H37Rv基因组作为模板,对基因Rv0880进行了分子克隆,成功构建了重组表达质粒pET28a-Rv0880,在大肠杆菌中实现了可溶表达,并且通过蛋白质印迹法检测重组子正确表达了 N末端带His标签的全长Rv0880蛋白。之后对Rv0880进行结晶实验,通过晶体筛选及优化得到了菱形体状晶体。X射线衍射收集到了 2.6 A分辨率的衍射数据,利用mosflm软件对所得到的晶体数据进行处理,结果显示Rv0880属于P1空间群,晶胞参数a=54.9701,b=69.5998,c=70.3204;α=103.71°,β=111.06°,γ=105.83°,但分子置换法解析结构因相位缺失未能成功。因此决定采用多波长反常散射法解析Rv0880结构,成功进行了 Rv0880硒代甲硫氨酸衍生物晶体的制备并且初步衍射数据良好。最后采用差示扫描荧光分析法以及等温滴定量热法在体外对Rv0880与水杨酸及其结构类似物的相互作用情况进行了研究,但是,研究结果显示水杨酸及其结构类似物与Rv0880均不结合。Rv0880在水杨酸引起的M.tb耐药中所起到的调控作用有待进一步探索研究。
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