由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是一种世界性病害,在蔬菜、果树、花卉等200多种植物中均能发生。该病的防控主要以化学防治为主。但由于灰葡萄孢菌是一种高抗药性风险的病原菌,对生产中常用的杀菌剂如多菌灵、乙霉威、嘧霉胺、腐霉利和啶酰菌胺等已经产生了抗药性,造成严重的经济损失。苯噻菌醋(benzothiostrobin)是由华中师范大学创制的一种新型甲氧基丙烯酸醋类杀菌剂(Qols),具有高效、广谱的抗菌活性,已经进入我国的农药登记程序。本文通过研究灰葡萄孢菌对苯噻菌酯的生物学特性、建立敏感性基线,评估其抗性发生的风险,并初步探讨其抗性机制,为灰霉病的可持续防控提供理论基础。研究结果表明:1.苯噻菌酯对灰葡萄孢菌的菌丝生长和孢子萌发具有强烈的抑制作用,且抑菌活性高于同类杀菌剂嘧菌酯;2.苯噻菌酯具有较好的跨层运输能力,但向上和向下的输导活性差,对灰霉病具有很好的保护作用,25 μg/mL时防效高达95%以上;3.采用菌丝生长速率法建立了灰葡萄孢菌对苯噻菌酯的敏感性基线,EC50值变化范围是0.0033～0.3921 μg/mL,平均EC50值为0.0859±0.0788 μg/mL,敏感性频率分布呈单峰曲线;4.苯噻菌酯与其它Qols如嘧菌酯、醚菌酯和吡唑醚菌酯存在正交互抗性,但与不同作用机制的杀菌剂无交互抗性;5.苯噻菌酯抗性菌株的生物适合度(菌丝生长、产孢能力和致病力)与敏感菌株相比无显著性差异;6.抗性菌株的细胞色素b(Cytb)143位发生点突变,基因型为G143A。综上所述,评估灰葡萄孢菌对苯噻菌酯存在较高的抗药性风险,建议苯噻菌酯与其它作用机制的杀菌剂混合使用来有效控制灰霉病,以降低抗药性发生的风险。由瑞士先正达公司开发的咯菌腈(fludioxonil)是目前防治灰霉病的有效药剂之一,2012年在我国获得登记。但国外已有灰葡萄孢菌对咯菌腈低水平抗性的报道。本文于2012-2014年检测了江苏和山东部分地区灰葡萄孢菌对咯菌腈的抗药性情况,并从生理生化和分子水平上研究了田间、室内抗药性突变体的特性,对咯菌腈的科学使用和抗性机理研究具有重要意义。结果表明:1.江苏地区未发现抗性菌株,但是从2013年分离自山东寿光的黄瓜灰葡萄孢菌和2014年分离自山东潍坊的番茄灰葡萄孢菌株中,发现了抗性菌株,低抗频率分别为10.67%和17.21%,高抗频率分别为2.67%和1.30%,这是在国际上首次发现田间高抗咯菌腈菌株;2.药剂离体驯化获得了 6株咯菌腈抗性突变体,抗性稳定,抗性倍数30～>10000;3.与敏感菌株相比,田间高抗菌株和药剂驯化抗性突变体的生物适合度(菌丝生长速率、产孢能力、致病力)均显著下降,并且对渗透胁迫(如0.8 M葡萄糖、0.5 M山梨醇、0.5 MNaCl、0.5 MKC1、0.2MCaCl2和0.3MMgCl2)高度敏感;4.用1μg/mL咯菌腈处理4h后,敏感菌株菌丝体内甘油含量及Bchog1表达量显著上升,上升幅度显著高于田间、室内咯菌腈抗性突变体;5.田间、室内高抗突变体的Bos1基因均发生突变,但二者有显著差异:田间高抗菌株的突变位点均位于该基因近N末端的HAMPs结构域,而药剂驯化高抗突变体的突变类型分为两种,位于HAMPs结构域,或者位于近C末端的HATPase_c结构域。因此推测:灰葡萄孢菌对咯菌腈高水平抗药性的产生是由菌体Ⅲ型双组份组氨酸激酶Bos1的突变引起的,该突变降低了菌体在药剂胁迫下HOG-MAPK途径的激活水平,使菌体内部甘油含量保持相对稳定,进而使其在药剂作用下存活下来。田间咯菌腈抗性群体的形成应引起人们密切关注,需改变该药剂的使用技术,降低药剂的选择压力,采用与其它杀菌剂轮换或混配使用技术,延缓抗药性的形成、发展和流行。频繁使用单作用位点的现代杀菌剂容易产生抗药性,为了延长现有防治灰霉病药剂的使用寿命,本文通过复配技术,旨在筛选出有效成分相容性好、生物活性高、增效作用显著的杀菌剂配方,这对灰霉病的防治及抗药性治理具有重要的现实意义。结果表明:1.苯噻菌酯与A、苯噻菌酯与B分别以1:1、1:4混配时增效作用最显著,SR值分别为3.2和2.5;2.这2种复配剂对灰霉病的温室防效优异,在25 μg/mL时防效达到100%,而且复配剂对灰霉病的防效要优于相同剂量各个单剂的防效;3.筛选出的这2个配方对灰葡萄孢菌多抗菌株也具有优异的抑菌活性,EC50均小于0.06 μg/mL,且MIC<0.5 μg/mL。因此,本文研发的2个杀菌剂配方对灰霉病的抗药性治理具有重要价值,但仍需要进一步通过田间药效试验进行评价。