中草药F对番茄枯萎病的抗菌活性研究

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本文以番茄枯萎病菌为供试菌种,以中草药F为研究对象,通过液-液分配、柱层析等方法从中草药F中分离得到主要抑菌活性成分2006-HS,主要研究结果如下:1.以95%乙醇为提取溶剂,采用冷浸法提取。离体实验表明粗提物对番茄枯萎病菌具有较强活性。粗提物对番茄枯萎病菌3d和4d的毒力回归方程分别为y3=0.8516x+3.8502(r=0.9697)和y4=0.7103x+4.0667(r=0.9557),计算出3d和4d的EC50分别为0.224g/L和0.206g/L。2.石油醚/70%乙醇(V:V=1:3)对粗提物进行液-液分配分离,石油醚去除了部分色素和杂质,水相将粗提物中极性大的物质分离出来,所得的油状物中活性物质含量提高,对番茄枯萎病菌的抑制作用增强。油状物相对番茄枯萎病菌离体试验3d和4d的毒力回归方程为y3=1.0274x+3.7194(r=0.9766)和y4=1.0082x+3.7751(r=0.9879),对番茄枯萎病菌的3d和4d的EC50分别为0.176g/L和0.164g/L,与粗提物相比,3d的EC50值下降了21.4%,4d的EC50值下降了20.3%,抑菌活性显著提高。3.采用硅胶柱,洗脱液为石油醚和乙酸乙酯,两次柱层析,得到了晶体。二次柱层析后的晶体对番茄枯萎病菌3d和4d的毒力回归方程为y3=0.8843x+4.5025(r=0.9481)和y4=0.9357x+4.3982(r=0.9647);5d毒力回归方程为y5=0.9651x+4.3309(r=0.9612)。晶体对番茄枯萎病菌的3d、4d和5d的EC50分别为0.037g/L、0.044g/L和0.049g/L,随时间的延长,活性有所下降,EC50值略有增大。与粗提物相比,3d的EC50值下降了79.0%,4d的EC50值下降了73.2%。4.晶体物质经高效薄层板“∏”形二维三次平面展开,在365nm紫外灯下快速观察,始终出现一个斑点,定名为2006-HS。晶体物质在高效液相色谱检测图谱中,只出现了单一的色谱峰,且对称性很好,其保留时间T=8.601min。5.活性物质2006-HS的热分析结果表明熔点为84.1℃。通过元素分析仪测定出活性物质2006-HS中含有C、H和O,三种元素的百分含量分别为74.25%、6.90%和18.85%。结合质谱,计算出活性物质2006-HS的分子量为244.28,推断出活性物质的分子式:C15H16O3。6.红外光谱分析说明活性物质2006-HS的分子结构式中含有C=O基、苯环、甲基。结合核磁共振数据,分析鉴定出活性物质2006-HS的化学结构式。
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