论文部分内容阅读
第一部分小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞胰岛素分泌的影响目的探讨小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1细胞胰岛素分泌的影响。方法四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）法检测小檗碱在基础培养基、高糖（葡萄糖25mmol/L）和高脂（软脂酸0.25mmol/L）培养基中对NIT-1细胞的增殖抑制作用，确定小檗碱干预的合适浓度范围。分别采用高浓度葡萄糖和软脂酸诱导NIT-1胰岛β细胞胰岛素分泌，并给予小檗碱干预1h和24h，放射免疫法检测NIT-1细胞胰岛素分泌的变化。结果MTT结果显示：在基础培养基和高糖培养基中，小檗碱在浓度为100μmol/L时对NIT-1细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05)；在高脂培养基中，小檗碱在浓度为30μmol/L对NIT-1细胞增殖就有明显的抑制作用(P<0.05)。3μmol/L、10μmo/L、30μmol/L小檗碱均能不同程度抑制NIT-1细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）以及软脂酸刺激的胰岛素分泌（PSIS）(P<0.05)。分别采用高浓度葡萄糖（Glu）和软脂酸（PA）诱导NIT-1细胞胰岛素分泌24h，然后给予10μmol/L小檗碱不同时间干预，结果显示：小檗碱干预1小时对高糖组和高脂组的GSIS有抑制作用(P<0.05)；但是，小檗碱干预24小时对高糖高脂诱导的NIT-1细胞的基础胰岛素分泌和GSIS均有促进作用(P<0.05，P<0.01)。结论小檗碱短时干预对高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞的胰岛素分泌有抑制作用，而较长时间干预则增加高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞的胰岛素分泌。第二部分小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞自噬的影响目的探讨小檗碱对高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞自噬的影响。方法分别采用高浓度葡萄糖（25mmol/L）和软脂酸（0.25mmol/L）诱导NIT-1细胞自噬，分为对照组（Con）、模型组（Model）、小檗碱组（Bbr）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激活剂组（AICAR）、AMPK抑制剂组（CompoundC）、雷帕霉素组（RAPA）。干预24小时后，Westernblot方法检测各组细胞AMPK、结节性硬化复合物1（TSC1）、微管相关蛋白1轻链蛋白3（LC3-Ⅱ）蛋白的表达，透射电镜观察各组细胞自噬体的形成。结果Westernblot结果显示：与对照组比较，高糖或高脂作用24小时后，NIT-1细胞AMPK蛋白表达减少，TSC1、LC3-Ⅱ蛋白的表达增加（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，小檗碱组、AICAR组、RAPA组AMPK、TSC1、LC3-Ⅱ蛋白表达增加（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，CompoundC组AMPK、TSC1、LC3-Ⅱ蛋白表达减少（P<0.05，P<0.01）。电镜结果显示：与对照组比较，高糖或高脂诱导后NIT-1细胞自噬囊泡均明显增加（P<0.05）；与模型组比较，小檗碱干预后自噬囊泡数目增多（P<0.05）。结论小檗碱对高糖或高脂诱导NIT-1细胞自噬有一定的促进作用，其机制可能与增加AMPK及其下游自噬相关TSC1、LC3-Ⅱ蛋白的表达有关。