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目的本论文以易被运动员滥用或检测难度较高的兴奋剂为主要研究对象,利用具有高分离效能和结构确证功能的液相色谱-串联质谱来探索、建立毛发中兴奋剂(酯类、母体、代谢物)的检测和评价方法,并使用建立的检测方法检测高血压患者头发中的p-阻断剂(美替洛尔和比索洛尔)和运动员头发β2-激动剂(克仑特罗),以证明检测方法的有效性,为采用毛发检测兴奋剂建立技术储备。方法称取50mg头发,加入5u1d3-睾酮作内标,100μ1蛋白酶K和100μl二硫苏糖醇在三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液中55℃水解2小时,加入正戊烷/乙醚,振荡、离心和冷冻,倒出上层有机相。融化下层后加入磷酸缓冲液、5μl内标和三氯甲烷／异丙醇振荡、离心和吸取上层液体后两次有机相混合吹干,最后用甲醇、流动相A和正己烷除去油脂,复溶(90%流动相A)后10μ1进样分析。由于酯类和非酯类复溶液不同,酯类和非酯类分开处理检测,酯类50mg头发,加10μl内标同上水解方法,加入正戊烷,振荡、离心和冷冻,吹干复溶液(90%流动相B)复溶后20uμ进样分析。结果与讨论通过优化色谱和质谱条件,非酯类和酯类分别采用X BridgeRP18(3.5μm,100mm×2.1mm)和Agilent ZORBAX XDB-C18(3.μ m,50mmX2. lmm)色谱柱,相对应的流速为0.2ml/min和0.4ml/min,最优进样量分别为10μl和20μl和最佳液相组成为2.5mM甲酸铵-0.2%甲酸-甲醇／乙腈(v：v=7：3)和2.5mM甲酸铵-0.2%甲酸-甲醇／乙腈(v：v=7：3)体系。前处理优化使非酯类检测选择使用正戊烷／乙醚和氯仿／异丙醇两步液液萃取,酯类选择了正戊烷液液萃取。方法验证中得出线性相关系数、最低检测限和最低定量限满足日常定量要求和头发中检测兴奋剂灵敏度的要求,大多数药物日间精密度<20%,日内精密度<20%,回收率在50%以上并且基质效应多在80%-120%之间,符合一般验证要求。将建立的检测方法进行方法验证和评估后应用于患高血压患者头发中β-阻断剂药物和运动员头发中克仑特罗的检测,做出满意结果。结论本研究建立了一套同时检测多类兴奋剂的方法和检测内源性类固醇内外来源的类固醇酯类的方法,并通过方法验证和患者和运动员实际头发样检测证明该方法是可行有效的,为头发中兴奋剂的检测提供了技术基础。