目的:1型糖尿病是以胰岛素缺乏及高血糖为主要特征的自身免疫性疾病。目前的治疗方法主要局限于外源性胰岛素注射。除此之外,应用转基因技术使非胰岛β细胞表达胰岛素是当前研究的热点之一。本实验旨在以壳聚糖为转基因载体研究人胰岛素基因在糖尿病鼠体内外的转染及表达。 方法:本研究以壳聚糖作载体将重组人胰岛素基因表达质粒体外转染鼠成纤维细胞,转染后经G418筛选抗性细胞,应用免疫组织化学方法检测胰岛素的表达;并用放射免疫分析法检测细胞培养液胰岛素水平。采用壳聚糖转染法将重组质粒经尾静脉转染入糖尿病大鼠体内,检测糖尿病大鼠体内胰岛素表达及血糖的变化。 结果:(1)人胰岛素基因转染组的成纤维细胞培养液中胰岛素水平显著高于未转染组(P<0.01)及质粒pCMV转染组(P<0.01),未转染组与pCMV转染组细胞培养液中胰岛素水平无显著差异(P>0.05)。(2)体内转染入胰岛素基因组大鼠血浆胰岛素水平显著高于生理盐水对照组(P<0.01)和pCMV对照组(P<0.01),生理盐水对照组和pCMV对照组胰岛素水平无显著差异(P>0.05)。 结论:人胰岛素基因在非胰岛β细胞及糖尿病大鼠体内转染成功和表达,说明应用转基因技术使非胰岛β细胞表达胰岛素有望成为1型糖尿病的重要治疗手段。壳聚糖具有安全、经济、可多途径给药等优点,是一种很有前途的胰岛素基因治疗载体。