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本论文包含2个部分。 1.检测猪伪狂犬病毒单抗夹心ELISA方法的建立和应用 伪狂犬病（Pseudorabies, PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus, PrV）引起的包括家畜和多种野生动物的一种以发热、奇痒及脑脊髓炎为症状的重要传染病。该病给养猪业造成了巨大的经济损失,猪是本病毒的天然宿主和贮存者。准确、及时地检测出病原是防止疾病扩散的重要措施之一。单克隆抗体的各种诊断方法在其它疾病的检测中得到广泛的应用,显示出灵敏性高、特异性强等优点。应用单克隆抗体来检测PrV在我国报道较少,为了能从感染PrV的动物体内和肉食品中检测出病原,本课题开展了以下研究。 1.1 将猪伪狂犬病毒Ea株在IBRS-2细胞上增殖培养后,纯化后免疫Balb/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0的骨髓瘤细胞融合。经ELISA筛选,获得两株分泌抗PrV单克隆抗体（MAb）的杂交瘤细胞,分别命名为4A6F5和3G7E3。免疫荧光试验和交叉试验证明两种单抗能特异性地与PrV反应,小鼠腹水中MAb的ELISA效价均为1:100×212。这两株单克隆抗体为病毒抗原的诊断研究提供良好的材料。 1.2 用纯化的病毒免疫健康猪,制备了抗PrV血清,提纯了IgG;将效价较高的一株单克隆抗体和抗血清IgG分别作为捕获抗体和检测抗体,用于建立检测PrV的双抗体夹心间接ELISA方法,并优化了反应条件,检测结果显示,该方法对PrV的检测灵敏度达31.2ng（0.312μg/ml）,与乙型脑炎病毒（JEV）、猪繁殖与呼吸障碍综合症（PRRSV）、细小病毒（PPV）和猪流感病毒（SIV）等病毒无交叉反应。批间和批内变异系数较小,介于为4.87%和1.07%之间。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测,肺和脑PrV抗原检出率最高,其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PCR对159份临床病料进行平行检测,二者的符合率可达到77.4%。实验结果表明:双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点,可应用于发病动物组织中PrV检测。 1.3 从武汉市及其周边地区市场收集97头份猪肉样本、57头份羊肉样本、50头份牛肉样本,应用双抗体夹心ELISA和聚合酶链式反应（PCR）方法平行检测样本中的伪狂犬病毒。检测结果显示:97头份猪肉样中,双抗体夹心ELISA方法PrV检出19份（19.6%）,gD-PCR检出25份（25.6%）;牛样本中ELISA阳性数为0,PCR阳性2份（4%）;羊样本中两种方法均为阴性。这2种方法均为阳性和阴性的总份数为12和170份,总符合率达到了89.2%,对部分ELISA阳性的样本,病毒分离也为阳性。 2 猪传染性胸膜肺炎毒素Ⅲ在巴斯德毕赤酵母中的表达和应用 胸膜肺炎放线