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研究目的:探讨DJ-1基因在骨髓瘤细胞介导促血管生成效应中的作用。研究方法:1.分别用无关序列 shRNA 病毒液(Control shRNALentiviralParticles-A)及靶向下调 DJ-1 的 shRNA 病毒液(DJ-1 shRNALentiviral Particles)感染RPMI8226骨髓瘤细胞株,使用含2%嘌呤霉素的培养液持续筛选稳定转染细胞,运用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测稳定转染细胞中DJ-1的表达情况以验证转染效果;2.慢病毒转染RPMI8226骨髓瘤细胞株下调DJ-1表达后,分别收集Control组、shControl组及shDJ-1组细胞的培养液上清作为条件培养基;3.CCK8比色法、transwell迁移实验、基质胶成管实验分别检测条件培养基对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外增殖、迁移、成管的影响;4.酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测条件培养基中血管内皮生长因子-A(Vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)、白介素-6(Interleukin 6,IL-6)、血管生成素 1(angiogeninl,Ang-1)的蛋白水平;5.Western Blot 检测 Control 组、shControl 组及 shDJ-1 组细胞中VEGF-A、bFGF、Ang-1 的表达情况。研究结果:1.DJ-1 shRNA慢病毒干扰载体(shDJ-1)转染RPMI8226骨髓瘤细胞株,用含2%嘌呤霉素的完全培养基持续培养,筛选出稳定转染细胞。经验证,shDJ-1转染的骨髓瘤细胞中DJ-1蛋白质水平明显低于Control组(P<0.001)及 shControl 组(P<0.001),而 Control 组与 shControl组(P=0.723)无明显差异,表明成功构建了 DJ-1下调的骨髓瘤细胞模型。2.条件培养基处理HUVECs后,shDJ-1组的HUVECs数目在不同时间点显著降低,相比较于 Control 组(24h:n=12601±3195 vs 14720±783,P<0.001;48h:n=23761±2366 vs 34802±3121,P<0.001;72h:n=38192±3097 vs 60151±1350,P<0.001;96h:n=62308±856 vs 74014±877,P<0.001)、shControl 组(24h:n=12601±3195 vs 14240±501,P<0.001;48h:n=23761±2366 vs 31984±1469,P<0.001;72h:n=38192±3097vs 59249±873,P<0.001;96h:n=62308± 856 vs 72960±2617,P<0.001)。3.慢病毒转染RPMI8226骨髓瘤细胞株后,shDJ-1组细胞条件培养基处理HUVECs后穿过Transwell小室的HUVECs数目明显减少,相比较于 Control 组(n=27.33±2.08 vs 38.67±4.04,P=0.004)、shControl 组(n=27.33±2.08 vs 36.33±2.52,P=0.01)细胞条件培养基。4.慢病毒转染RPMI8226骨髓瘤细胞株后,shDJ-1组细胞条件培养基处理HUVECs,在8h、12h后基质胶上形成的“树芽状”分支数目显著低于 Control 组(8h:n=14.25±2.22 vs 33.00±3.92,P<0.001;12h:n=27.75±2.22 vs 58.00±3.37,P<0.001)、shControl 组(8h:n=14.25±2.22vs 32.00±2.94,P<0.001;12h:n=27.75±2.22 vs 53.50±4.04,P<0.001)。5.慢病毒转染RPMI8226骨髓瘤细胞株后,shDJ-1组细胞条件培养基中 VEGF-A、bFGF、IL-6 水平较 Control 组(bFGF:2.01±0.03 vs 2.08±0.07pg/mL,P<0.001;VEGF-A:10.66±0.21 vs 12.19±0.92pg/mL,P<0.001;IL-6:1.24±0.03 vs 1.32±0.10pg/mL,P=0.001)、shControl组(bFGF:2.01±0.03 vs 2.060.03pg/mL,P=0.006;VEGF-A:10.66±0.21 vs 11.77±0.71pg/mL,P<0.001;IL-6:1.24±0.03 vs 1.29±0.07pg/mL,P=0.04)细胞条件培养基水平显著降低,而各组之间Ang-1的水平无明显差异(2.06±0.05 vs 2.12±0.16 vs 2.08±0.09ng/mL,P=0.072)。6.shDJ-1转染RPMI8226骨髓瘤细胞株后,细胞中VEGF-A、bFGF表达水平较Control组(VEGF-A:P<0.001,bFGF:P<0.001)及 shControl组(VEGF-A:P<0.001,bFGF:P<0.001)明显降低,而各组之间Ang-1的表达无明显差异(P=0.153)。结论:下调骨髓瘤细胞DJ-1的表达抑制骨髓瘤细胞介导HUVECs体外增殖、迁移及血管生成,提示DJ-1基因在骨髓瘤细胞介导的促血管新生效应中发挥重要作用,其机制可能与VEGF-A、bFGF、IL-6等促血管生成因子分泌降低有关。