肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factorα，TNF-α）可通过介导多种病理生理反应参与中枢神经系统（central nervous system，CNS）疾病的发生发展，其中微血管内皮细胞（microvascular endothelial cells，MVECs）是TNF-α作用的主要靶细胞之一。由于脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells，BMVECs）间形成的紧密连接是构成血脑屏障的结构基础，对于维持脑组织内环境的相对稳定具有重要作用，因此，研究TNF-α对BMVECs功能的影响，不仅有利于阐明TNF-α在脑部疾病中的作用机制，而且有利于开发针对性的预防和治疗措施。　　 目的利用原代分离培养的人脑微血管内皮细胞（human brain microvascularendothelial cells，HBMVECs），检测TNF-α对HBMVECs分泌细胞因子、表达粘附分子和产生基质金属蛋白酶的影响，并检测TNF-α对HBMVECs凝血和纤溶活性的影响，以分析TNF-α在中枢神经系统疾病中的作用机制。　　 方法：从人脑组织分离、纯化和培养微血管内皮细胞。通过细胞免疫荧光染色检测经典的内皮细胞表面标志vWF（von Willebrand Factor）、CD31的表达，并在荧光显微镜下观察其对低密度脂蛋白的摄取。通过流式细胞术检测vWF阳性细胞比例判断内皮细胞的细胞纯度。扫描电子显微镜和透射电子显微镜检查细胞间的紧密连接。应用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测TNF-α刺激前后HBMVECs表达细胞间黏附分子-1（intercellular adhesionmolecule-1，ICAM-1）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）水平；应用明胶酶谱法检测细胞产生的基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）活性。观察TNF-α和内毒素（lippolysaccharide，LPS）刺激前后HBMVECs凝血纤溶活性变化：一期凝固法检测促凝血活性（procoagulant activity，PCA）活性；ELISA、实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time PCR）检测细胞组织因子（tissue factor，TF）、血栓调节蛋白（thrombomodulin，TM）、组织型纤溶酶原激活物（tissue-type plasminogen activator，t-PA）、纤溶酶原激活物抑制物（plasminogen activator-inhibitor-1，PAI-1）的水平。　　 结果：分离、纯化的人脑微血管内皮细胞呈现单层生长和接触抑制的生长特性，表达内皮细胞典型的标志分子vWF、CD31，并摄取乙酰化低密度脂蛋白（acetylated low density lipoprotein，Dil-Ac-LDL）。流式细胞术分析vWF阳性细胞比例显示细胞纯度在95％以上。扫描电镜显示细胞间无间隙，透射电镜检查证实细胞间存在高电子密度的紧密连接。这种结构是脑微血管内皮细胞特有的形态特征。TNF-α对HBMVECs的功能有明显影响：ELISA结果显示，TNF-α剂量依赖性地上调HBMVECs表面黏附分子ICAM-1的表达，增加细胞因子IL-6的释放；明胶酶谱分析发现TNF-α刺激后HBMVECs产生的MMP-2明显增加。ELISA和Real-time PCR结果显示，LPS和TNF-α促进HBMVECs的凝血活性，上调PCA和TF的产生，抑制抗凝血活性，下调TM的表达；并明显促进纤溶活性因子t-PA和PAI-1的表达。通过比较PCA/TM和PAI-1/t-PA的比值发现，TNF-α对HBMVECs凝血活性的影响明显强于LPS。　　 结论： TNF-α可能通过影响HBMVECs的功能，导致脑微血管功能障碍，从而在多种中枢神经系统疾病中发挥病理作用。