水稻氯离子通道蛋白基因OsCLC的克隆、表达和功能分析

来源 :上海大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:winterzeng
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在得到公认的、7种植物所必需的微量元素中,Cl元素虽然是最晚被发现的,但对植物正常的生长和发育过程起着举足轻重的作用。目前,氯离子通道(Chloride Charmel,CLC)一般被认为与渗透调节、气孔运动、营养物质运输、金属耐性、信号识别与转导等诸多功能有关。关于植物氯离子通道蛋白全序列克隆和功能的研究开展起步较哺乳动物晚,而且多在拟南芥、烟草等双子叶植物中进行。水稻作为单子叶植物的代表植物和最重要的粮食经济作物之一,关于氯离子通道的研究报道并不多见。 本研究在水稻全基因组测序基本完成的前提和基础上,利用抑制消减杂交法(SSH)建立的水稻分化愈伤组织对愈伤组织的差减文库,针对特异性表达的EST序列进行分析和设计,首次从粳稻品种武进9998-3中分离到一个氯离子通道蛋白编码全长基因OsCLC,并对其表达谱和功能进行了初步的研究,其主要结果如下: 1)以粳稻品种武进9998-3为材料,扩增出一个2429bp的全长cDNA序列 OsCLC(登录号:DQ272692)。该序列具有完整的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),编码808个氨基酸,结构预测表明OsCLC具有11个疏水跨膜区、1个电压门控的氯离子通道结构(Voltage CLC)、1个胱硫醚β-合酶(Cystathionine-beta-synthase,CBS)结构域和3个与阴离子选择性有关的高度保守区(GSGIPE、GKAGPLVH和PVGGVLF);与烟草CLC-Ntl、拟南芥AtCLC-a、AtCLC-b、AtCLC-c、AtCLC-d和水稻日本晴OsCLC-1、OsCLC-2相似程度分别达到59%、54%、52%、58%、47%、63%和63%; 2)用乙酸锂转化法将OsCLC基因导入酿酒酵母单一的氯离子通道基因ScCLC(Gefl)缺失的突变菌株中进行功能互补实验,可使其在添加有NaCl的培养基上生长功能得到部分恢复,且互补程度在高盐浓度下更加明显;同时在培养基中添加CaCl<,2>、KCl、MgCl<,2>(Cl<->浓度为500 mmol/L)的结果显示:不同类型的阳离子对OsCLC的互补作用无影响;这些结果提示我们OsCLC基因可能在细胞内起到平衡质子电荷的作用。 3)实时荧光定量PCR(Real-time PCR)SYBR Green I荧光染料法检测OsCLC基因表达谱分析表明: a)该基因在水稻的幼穗、旗叶、叶鞘、根、节、节间、叶、愈伤、芽点等组织中均有表达,根中的表达量最高;与日本晴的OsCLC-1表达情况类似,属于非组织特异性表达基因。 B)在0、50、100、200 mmol/LNaCl胁迫下,其表达量与盐浓度、胁迫时间相关:盐胁迫环境下生长1hr后,200 mmol/L NaCl胁迫下的表达量陡升至2.70倍,0、50、100 mmol/LNaCl基本无变化;8hr后50、100 mmol/L NaCl胁迫下的表达量分别达到2.74倍和3.16倍,同时200 mmol/LNaCl胁迫下的表达量却已降低至1.52倍;16hr后各浓度胁迫下的表达量均回落到起始量并再无明显变化。推测该基因在盐胁迫环境下能快速响应表达上调,通过氯离子外排参与调控水稻对净氯离子的吸收,增加水稻的耐盐性,降低盐化对水稻生长的影响。
其他文献
摘要:从科技的不断发展中,多媒体也逐渐被人们应用越来越广泛,在数学的教学中,多媒体的使用使初中数学更加直观化、形象化。不仅使学生更容易理解,也使老师更轻松一些,但是虽然有其好处,但在应用中,也会出现一定的问题。这就需要大家共同的努力,共同去克服,在教学中,一定要注意良好的对学生进行引导,努力改造其应用中出现的问题,这样方可保证数学多媒体应用的良好发展。  关键词:初中数学;多媒体教学;数学教学多媒
目的:通过荷人卵巢癌(SKOV3)裸鼠模型,研究乳源免疫调节肽(immunodulatingpeptide)的抑癌作用,并从细胞凋亡(Apoptosis)及相关基因bcl-2、caspase-3的表达情况等探讨其可能的机
摘要:识谱教学不仅是课堂教学的重要内容之一,更是培养音乐素养的一个重要途径,学生掌握一定的识谱能力对于音乐教学是必要的,识谱,是打开音乐大门的钥匙,识谱能力的提高对学生感受、理解、表现及创造音乐有着重要的作用。同时,“识谱”教学是基础知识与基本技能教学中的组成部分。  关键词:小学音乐;识谱;教学;作用在小学音乐教学中,教会孩子们识谱,能使他们的音乐兴趣得以持续与发展,为他们进一步感受和学习音乐打
羊草是欧亚大陆东部草原带的主要建群种,然而在自然条件下有性生殖能力低,种子产量少,严重影响着对其的人工利用。施肥及光照均是影响作物产量的重要途径,本文针对在目前羊草种子生产中,对施肥及遮光处理研究报道较少的现状,运用正交实验设计的方法和不同生育期遮光的方法研究了施用N、P、K肥及减短羊草光照时间对羊草抽穗率、结实率和种子产量的影响。不同种类和配比施肥的研究结果表明,不同时期施用N、P、K肥虽然对当
NOK/STYK1蛋白是一种新的在结构上比较独特的受体型酪氨酸蛋白激酶家族成员,具有较强的促肿瘤形成及转移的能力,并参与细胞的内吞过程。结构序列分析结果表明在NOK基因的氨基酸
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)重组菌株HD73(pHC39)能同时产生双金字塔形和立方体形伴孢晶体,其晶体蛋白分别仅由cry1Ac和cry2Aa基因编码形成。本研究对双金字塔
目的:探讨褪黑素(melatonin,MLT)是否可通过ERK/MAPK通路调控动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型兔动脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase ,MLCK)的表
本文以中国大鲵(Andrias davidianus)为研究对象,利用光学显微镜和扫描电子显微镜观察,综合运用石蜡切片、冰冻切片、凝胶电泳等技术,对中国大鲵的输卵管组织学结构及其相关功能
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
摘要:新课标要求,教学过程中发挥学生的主体作用,课程教学面向学生的全面化发展,教师必须以多元化的教学方式创建高效的课堂情境,以此实现课堂教学目标。适应于其要求,农村初中地理教学,必须全面认识学生的学习主体地位,转变教师角色,采用多样灵活的教学方式,为学生创造一个开放、和谐的学习空间,以此调动学生的学习积极性,促使学生学习能动性的发挥。  关键词:初中地理;实践教学;地理教学虽然初中地理学科并非作为