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本试验检测蒲公英乙醇提取物与狼毒总黄酮对乳房炎主要致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的抑制作用,以及消炎、解热等药效作用。根据提取物间组合抑菌效果,筛选最佳抑菌比例作为注射液制备的处方,选择合适溶剂、附加剂制备注射液。并检查蒲公英-狼毒注射液的杂质、稳定性及安全性以及注射液对巨噬细胞吞噬作用及免疫器官的影响。试验结果见下:1.测定蒲公英乙醇提取物与狼毒总黄酮对乳房炎主要病原菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的抑制作用,显示蒲公英40%乙醇提取物(40%HT)的最小抑菌浓度(the minimal inhibitory concentration,MIC)分别为0.31,0.31,1.25 mg/mL,最小杀菌浓度(the minimum bactericidal concentration,MBC)分别为10,10,40 mg/mL;蒲公英90%乙醇提取物(90%HT)的MIC分别为0.62,0.31,1.25 mg/mL,MBC为10,40,40 mg/mL;狼毒总黄酮(TFC)的MIC为0.078,0.078,0.16 mg/mL,MBC为2.5,5.0,5.0 mg/mL;且40%HT与TFC之间存在相互促进作用。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀及牛奶致热模型,研究上述提取物的抗炎及解热作用,表明TFC具有较强的抗炎作用,蒲公英乙醇提取物可有效的抵抗牛奶致热。2.根据40%HT与TFC组合抑菌效果筛选出40%HT:TFC=4:1作为处方,以乙醇:水:丙二醇=1:4.5:4.5为溶剂溶解,加入硫代硫酸钠及甘氨酸作为附加剂制备注射液。3.建立新狼毒素B的紫外分光光度检测法,结果表明,新狼毒素B在1~10μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.994,n=6)。检测注射液蛋白质、鞣质、草酸、树脂等各项指标,结果均符合《中华人民共和国药典2005年版》规定。4.应用光加速试验及热加速试验检测注射液稳定性,预计其25℃的有效期为两年;经检查注射剂热原、溶血性、刺激性均符合安全性规定。半数致死量试验表明LD50为1924.23 mg/kg,表明此注射液可安全使用。5.应用巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及免疫器官指数试验检测注射液免疫增强作用,结果显示注射液在100 mg/mL可极显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能(P<0.01),极显著增加脾的重量(P<0.01)。本试验检测了蒲公英乙醇提取物及狼毒总黄酮的主要药效作用并制备了注射液,为蒲公英及狼毒总黄酮应用以及乳房炎的治疗提供了试验依据。