白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)是由多种不同类型细胞产生的具有多效性的细胞因子。大量研究表明,鸡IL-6(chicken interleukin-6, chIL-6)能增强机体免疫力,还能提高疫苗接种所产生的抗体水平。为了将chIL-6应用于兽医临床,本研究利用毕赤酵母真核表达了chIL-6,建立了表达产物的提纯方法,还评价了chIL-6在体内外的生物学活性。本研究首先将chIL-6基因片段克隆入载体pET32(+)中,在大肠杆菌中表达了chIL-6;利用表达产物制备了鼠抗chIL-6多抗,用于检测毕赤酵母表达的chIL-6。随后,将编码chIL-6成熟肽的基因插入到酵母表达载体pPICZaA中,电穿孔整合入毕赤酵母菌株GS115,通过博莱霉素筛选得到1株高抗性的阳性转化子(GS115-pPICzaA-IL-6).以1%甲醇诱导GS115-pPICzaA-IL-6菌株,经Western Blotting检测证明重组chIL-6(rchIL-6)得到表达,其表达量为162mg/L,占上清总蛋白的64.5%。rchIL-6经超滤浓缩、透析后,根据其等电点值,确定以DEAE阴离子交换层析进行提纯。提纯后的rchIL-6浓度为128mg/mL,回收率为75.9%。本研究以IL-6依赖的细胞株7TD1及鸡外周血淋巴细胞为指示细胞,通过MTT法检测毕赤酵母表达的chIL-6的生物活性。结果显示,chIL-6均具有促进7TD1细胞生长的活性,当chIL-6浓度为125pg/mL时该活性最高,过高或过低浓度的chIL-6都不利于7TD1细胞生长；chIL-6能促进鸡淋巴细胞增殖,且该活性与chIL-6浓度具有剂量依赖的关系。本研究还评价毕赤酵母表达的chIL-6的免疫佐剂作用。将21日龄试验鸡随机分为3个处理组(chIL-6+H9亚型禽流感疫苗组、H9亚型禽流感疫苗组和健康对照组),通过检测疫苗免疫后的抗体效价、T淋巴细胞亚群分类及攻毒后的排毒情况,分析了chIL-6对H9亚型禽流感灭活疫苗的免疫增强作用。经流式细胞仪检测显示,chIL-6+H9亚型禽流感疫苗联合免疫组CD4+/CD8+比值高于H9亚型禽流感疫苗组及健康对照组,并且CD4+T淋巴细胞亚群所占比例要高于CD8+T淋巴细胞。chIL-6+H9亚型禽流感疫苗组的抗体水平高于其他试验组,且差异显著(p<0.05)；在用H9亚型禽流感病毒攻毒后,chIL-6+H9亚型禽流感疫苗组的排毒率显著低于其他试验组(p<0.05)。以上结果表明,chIL-6能增强机体的细胞免疫功能,并能提高H9禽流感灭活苗的抗体水平及攻毒保护率。