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目的:探讨非甾体抗炎药塞来昔布作用于结肠癌干细胞,通过调控Wnt信号通路中β-catenin从而对其“干性”、分化程度的影响及可能存在的机制。方法:1.流式分选HT-29和SW480得到CD133~+/CD44~+双标的的结肠癌干细胞后进行悬浮培养;2.采用CKK8法检测塞来昔布对CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞增殖的影响,并且选取合适的药物浓度梯度。3.TUNEL实验检测塞来昔布干预后对CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞晚期凋亡的影响;4.塞来昔布干预CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞后,观察其对细胞成球能力的影响。5.塞来昔布干预CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞后,观察其对克隆形成能力的影响。6.用塞来昔布处理CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞后,用PCR法检测重要干性标志物Lgr5、Sox2和分化标志物Vilin、Muc2以及β-catenin在mRNA水平的表达7.进一步用Western-Blot检测Lgr5、Muc2以及β-catenin、磷酸化的β-catenin蛋白水平的表达。结果:(1)CCK-8结果显示不同浓度的塞来昔布(5、10、20、40μmol/L)作用于一定时间(24h、48h、72h)后,与对照组相比,塞来昔布呈剂量和时间依赖性地抑制CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞增殖(p<0.05)。(2)TUNEL实验中显示在20μmol/L塞来昔布作用于CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞可诱导其晚期凋亡。(3)成球实验显示,20μmol/L塞来昔布作用CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞10天后,CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞成球数量和体积明显地降低(p<0.05)。(4)克隆形成实验显示,用20μmol/L塞来昔布处理后14天后,CD133~+/CD44~+结肠癌干细胞克隆形成能力明显地降低(p<0.05)。(5)PCR法检测干性指标Lgr5、Sox2在mRNA水平的表达下调,分化指标Muc2、Villin在mRNA水平的表达上调,以及β-catenin在mRNA水平的表达下调、磷酸化的β-catenin在mRNA水平的表达上调(p<0.05)。(6)Western-Blot发现干性指标Lgr5蛋白水平的表达下调,分化指标Muc2在蛋白水平的表达上调,以及β-catenin在蛋白水平的表达下调、磷酸化的β-catenin在蛋白水平的表达上调(p<0.05)结论:(1)塞来昔布能够有效地抑制结肠癌干细胞的增殖和诱导其凋亡。(2)塞来昔布处理后的结肠癌干细胞,可降低Wnt信号通路中β-catenin表达、增加磷酸化β-catenin的表达,其下游靶标干性标志物Lgr5和Sox2的表达均降低,在行为学行上其成球能力和克隆形成能力也明显的降低,说明塞来昔布可在一定程度上抑制结肠肿瘤干细胞的“干性”。(3)塞来昔布作用结肠癌干细胞后,可使其分化指标Muc2和Villin的表达增加,说明塞来昔布具有促进结肠癌干细胞向成熟分化的能力。