目的:　　 本研究尝试通过动物实验,观察肺岩宁方对Lewis肺癌移植鼠外周血免疫细胞因子TGF-β1的影响;对脾脏淋巴细胞增殖、CD4+CD25+Treg细胞数量的影响;以及对小鼠肿瘤组织内转录因子Foxp3 mRNA和蛋白表达水平的影响,探讨肺岩宁方对肺癌肿瘤微环境中调节性T细胞的调控作用,并通过观察Lewis肺癌移植鼠模型在肺岩宁方、化疗等不同干预治疗中,其检测指标的异同及相关性,为进一步探索肺癌的最佳中西医联合治疗方式提供可靠的实验基础;从而弥补目前从肿瘤微环境及调节性T细胞角度研究中医经验方肺癌免疫治疗作用的不足。　　 方法：　　 选用近交系C57BL/6纯系小鼠32只,将Lewis肺癌细胞悬液接种于小鼠右腋皮下造模,接种后小鼠随机分为4组:对照组、化疗组、肺岩宁组、综合组,每组8只。接种后第5d开始给药,对照组以生理盐水0.4 ml灌胃14d;化疗组于给药的第1,3,5 d,DDP溶液1ml(含DDP0.1mg)腹腔注射化疗,同时生理盐水0.4 ml灌胃14d;肺岩宁组以肺岩宁药液0.4 ml(含生药0.8g)灌胃14d。综合组的化疗同化疗组,肺岩宁用法同肺岩宁组。给药14天后分别用EIASA法检测小鼠外周血浆细胞因子;MTT法检测脾脏T淋巴细胞的增殖情况;流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+Treg细胞含量;real-time PCR方法检测肿瘤组织Foxp3mRNA表达;Western Blot法检测肿瘤组织Foxp3蛋白表达水平;以及免疫组化法检测肿瘤组织Foxp3 Treg细胞表达。　　 结果：　　 1.各组瘤重及抑瘤率:　　 实验各组小鼠的成瘤率为100％,各组平均瘤重(单位:克)分别为:对照组(1.20±0.24),化疗组(0.43±0.13),中药组(0.82±0.16),综合组(0.23±0.06)。综合组的瘤重显著低于其余三组(P＜0.01),化疗组与中药组差异不显著(P＞0.05)。抑瘤率依次分别为:中药组31.67％,化疗组64.17％,综合组80.84％。　　 2.MTT法检测脾脏T淋巴细胞的增殖情况:　　 各组脾脏T淋巴细胞刺激指数分别为:对照组(11.116±2.387),化疗组(7.181±1.604),中药组(17.393±4.290),综合组(41.963±10.171)。综合组与中药组T淋巴细胞增殖功能显著高于对照组(P＜0.01),而化疗组和对照组差异不显著(P＞0.05)。　　 3.ELISA法检测小鼠外周血TGF-β1水平各组比较　　 经小鼠眶后静脉丛采血后分离血清,采用ELISA法检N d,鼠外周血TGF-β1水平。各组分别为:对照组(0.286±0.017),化疗组(0.228±0.013),中药组(0.190±0.022),综合组(0.136±0.013)。与对照组相比,化疗组、中药组、综合组TGF-β1水平均低于对照组,且差异显著(P＜0.01),其中以综合组TGF-β1水平显著低于其他各组(P＜0.01)。　　 4.流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞含量:　　 通过流式细胞术对小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞含量检测,结果显示:各组CD4+CD25+Treg细胞占CD4+Tcell的比例分别为,对照组(3.41±0.47),化疗组(3.38±0.18),中药组(3.21±0.35),综合组(2.26±0.64)。对照组略高于化疗组和中药组,差异不显著(P＞0.05);化疗组和中药组相比,差异不显著(P＞0.05),综合组的比例显著低于其它三组,与对照组、化疗组、中药组相比,差异显著(P＜0.01)。　　 5.real-time PCR方法检测肿瘤组织Foxp3 mRNA表达:　　 小鼠肿瘤组织Foxp3 mRNA表达水平:中药组为对照组的0.666倍,化疗组为对照组的0.601倍,综合组为对照组的0.409倍。　　 6.Western blot法检测转录因子Foxp3蛋白表达水平:　　 小鼠肿瘤组织中转录因子Foxp3蛋白表达水平检测显示,Foxp3蛋白表达水平中药组为对照组的0.5432倍,化疗组为对照组的0.5556倍,综合组为对照组的0.4567倍。　　 7.免疫组化法检测肿瘤组织Foxp3 Treg细胞表达　　 通过免疫组化法对小鼠肿瘤组织进行检测,可见Foxp3蛋白阳性染色为在细胞核内,呈褐色颗粒。每组取12张切片,由病理医师双盲方法分别观察显示,高倍镜下观察,可见弱阳性表达Foxp3的Treg细胞,但四组比较均无统计学差异。　　 结论：　　 通过分别采用ELISA法、流式细胞术、teal-time PCR法、Western blot法,对Lewis肺癌移植鼠外周血清TGF-β1、脾脏CD4+CD25+Treg细胞含量以及肿瘤组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平表达进行检测,发现与模型组比较,肺岩宁及化疗药物顺铂均可在不同程度上影响其水平,同时各项检测均显示肺岩宁配合化疗药物顺铂具有协同作用,对于从不同环节调控调节性T细胞均显示与其它单一治疗相比存在一定治疗优势。　　 联系肺岩宁以往研究,鉴于肿瘤微环境中免疫问题的复杂性,针对中医药本身所具有整体性的特点,认为如果尝试运用非线性思维,结合混沌控制理论,有可能为未来的研究带来新的突破。