【摘 要】
:
5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)是一种重要的DNA甲基化修饰,与疾病的产生有着重要联系。当前5hmC的定量分析方法中,样品前处理大部分用到了化学试剂。这些方法不仅步骤繁琐,还会对DNA造成一定的损伤。因此,有必要建立操作简便、不使用化学试剂的5hmC定量分析方法。二硫苏糖醇(DTT)是一种巯基保护剂,在生物化学和细胞生物学中有着广泛的应用。当前,DTT的检测分析方法常见的有荧光探针法和液质联用法,但是
论文部分内容阅读
5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)是一种重要的DNA甲基化修饰,与疾病的产生有着重要联系。当前5hmC的定量分析方法中,样品前处理大部分用到了化学试剂。这些方法不仅步骤繁琐,还会对DNA造成一定的损伤。因此,有必要建立操作简便、不使用化学试剂的5hmC定量分析方法。二硫苏糖醇(DTT)是一种巯基保护剂,在生物化学和细胞生物学中有着广泛的应用。当前,DTT的检测分析方法常见的有荧光探针法和液质联用法,但是这些分析方法有的需要耗费大量的有机试剂,有的需要设计合成特定探针,有的步骤繁琐,花费时间较长。因此,建立一种快速、便捷的DTT检测方法非常有必要。本论文的具体研究内容如下:一、基于免化学氧化法和连接-实时定量荧光PCR扩增技术,建立了一种步骤简便、特异性好的特定位点5hmC检测方法,实现了对鼠脑DNA中特定位点5hmC百分比含量的检测。该方法分别用T4噬菌体β-葡糖基转移酶(β-GT)和Aba SI限制性内切酶对目标链进行糖基化和酶切处理,使用连接酶连接Hairpin探针和处理后的目标链,之后利用实时定量荧光PCR技术对连接产物进行扩增,实现检测5hmC的目的。该样品处理方法不使用化学试剂,简化了实验步骤,避免了对DNA样品的损伤。用建立的分析方法检测了特定位点5hmC的含量和胞嘧啶的总含量。另外,本文将该方法应用到了鼠脑DNA样品中某一特定位点5hmC的百分比含量的测定。二、基于不对称PCR技术和便携式血糖仪检测5hmC。该方法使用免化学氧化的方法对目标链5hmC进行处理,之后用连接酶连接Hairpin探针和处理后的目标链,使用不对称PCR技术扩增出单链,利用磁珠捕获分离单链产物。之后使用磁珠上的单链产物与蔗糖转化酶修饰的探针进行杂交,利用蔗糖转化酶将蔗糖转化为葡萄糖。通过便携式血糖仪检测葡萄糖浓度,间接实现对5hmC的便捷检测。该方法不需使用昂贵仪器,成本低。三、线性探针介导的连接-PCR反应检测5hmC。该方法使用免化学氧化的方法对目标链进行处理,用线性探针进行连接反应,结合实时定量荧光PCR技术对连接产物进行扩增,实现5hmC的检测。相较于Hairpin探针,线性探针可以有效降低非特异扩增。四、基于DNA修饰的Au NPs可视化检测DTT。此方法使用单链DNA修饰的金纳米粒子检测DTT。DTT中的双巯基可以破坏单链DNA与金纳米粒子之间的作用力,使得单链DNA释放,体系颜色由红色变为蓝色,裸眼观察体系颜色变化即可实现对DTT的可视化检测。测定特定波长下体系的吸光度,利用吸光度比值与DTT浓度的关系可快速定量检测DTT。此方法不仅步骤简便,耗时少,而且干扰较小。
其他文献
全球水污染问题日益引起人们的重视,开发一种简便有效的方法治理水体污染是人类一个急需解决的问题。在所有治理手段中,光催化处理有机污染物的技术,由于其价廉、无毒、节能、高效的优势,逐渐成为当前国际热门研究领域之一。金属-有机骨架(MOFs)具有比表面积高、孔隙率高、热稳定性好等优点,并且它的物理和化学性质可以通过使用不同的有机配体或金属离子来调节,致使MOFs在光催化降解方面成为一类潜在应用前景的多孔
癌症作为威胁人类健康的头号杀手,已成为人们亟待解决的难题之一。光热疗法(Photothermal Therapy,PTT)利用了肿瘤细胞对热的敏感性来诱导细胞凋亡或增加肿瘤细胞对放化疗的敏感性,临床应用前景广阔。与手术、放疗和化疗等传统癌症治疗方法相比,PTT具有治疗时间短、疗效显著和副作用小等优点,但PTT也存在许多弊端,如:高温会对肿瘤周围正常组织造成不可避免的热损伤,进而诱发炎症;热休克蛋白
电化学传感器具有功耗低、灵敏度高、成本低、操作简便等优点,被广泛应用于电化学催化、环境监测等各个领域。金属-有机骨架材料(MOF)是一类由金属离子和有机配体通过配位作用生成的材料,因其比表面积大、易调节与功能化等特点而成为非常具有前景的功能材料。但由于MOF材料的导电性能较差,在很大程度上限制了其在电化学领域的应用。因此,通过将MOF材料进行后修饰并与其它功能材料复合可能成为一种能够有效解决上述问
蛋白靶向嵌合体技术(PROTAC)是近几年医药研发领域的一项重点技术,其作用机制主要依靠生物体内自然存在的泛素--蛋白酶体系,将致病蛋白降解,从而达到治疗疾病的目的。PROTAC属于双异功能分子,主要由靶蛋白(POI)结合配体与E3泛素连接酶配体组成,两个分子之间使用连接链(linker)相连接。PROTAC可以将“不可成药”靶点转化成“可成药”靶点,这种优势是其它小分子药物所无可比拟的。因其仅需
偶氮亚胺碱是有机合成中一类重要的1,3-偶极体,在1,3-偶极环加成反应中有着广泛的应用,它可以通过1,3-偶极环加成反应以高产率得到具有重要合成价值的吡唑烷类化合物,这类化合物是具有潜在药物活性的含氮杂环化合物。除此之外,偶氮亚胺碱衍生物还是构建其它更为复杂的分子骨架的关键原料之一。而如何快速有效的构建含有偶氮亚胺碱结构的杂环化合物的研究却少有报道,基于该类化合物稳定的化学性质以及在有机合成中的
化学动力学治疗(CDT)是一种基于Fenton或类Fenton反应的肿瘤治疗方法。与其他治疗方法相比,CDT由肿瘤微环境(TME)中过量产生的H2O2触发,能有效避免对正常组织的损伤,具有肿瘤选择性。此外,CDT不需要昂贵复杂的仪器设备,可降低治疗成本。虽然CDT已展现出一定的抗肿瘤能力,然而,多数CDT催化剂催化效率有限、肿瘤细胞内H2O2含量不足以及因金属离子催化剂的长期累积造成的毒副作用等问
吲哚螺环化合物是众多天然产物和药物分子中普遍存在的核心结构,往往具有重要的生物活性。其中具有多个立体中心的吲哚螺环化合物的构建在天然产物和药物合成中被称为是重大的合成挑战。因此,人们付出了巨大的努力开发新颖有效的策略来合成具有高度对映选择性的此类化合物。近年来,氮杂环卡宾(NHC)有机催化受到了极大的关注。通过NHC催化的不对称环化反应可以实现众多碳环和杂环化合物的不对称合成。基于NHC独特的催化
Salen配体是一种含有亚胺官能团的席夫碱,易于修饰,与金属离子配合后可增加稳定性。它还可以引入手性结构,形成有价值的手性金属催化剂。使用salen配合物构建MOFs可以使通道中金属的活性位点有规律地排列,从而提高催化效率,促进分离和回收。因此,salen配合物的研究是非常重要和有价值的。由此本文设计合成了新颖的带有多个取代基的水杨醛,并与三种不同结构的二胺合成吡啶salen配体L1、L2和L3,
固有的螺旋结构和扩展的π共轭使螺烯及其衍生物呈现优良的光电性质和特异的手性光学性能,在不对称合成和有机电子学中具有重要的应用前景。利用杂原子替代螺烯分子中sp~2碳,构建的杂螺烯芳烃带隙、光电性能可调,且合成相对简单。为此,本论文拟将杂原子氮、氧嵌入到芳烃分子中,设计合成了一系列杂螺烯芳烃分子,表征了所得分子光物理化学性能,并构筑了光学器件,测试了材料的非线性光学性能,发现氮杂螺烯衍生物具有优良的
近年来,研究人员发现肿瘤之所以产生耐药并容易复发,很大程度上是因为肿瘤干细胞(CSCs)的存在。然而,CSCs长期处于一个乏氧的肿瘤微环境(TME),这就使得CSCs进入静止期来适应乏氧。因此,克服肿瘤乏氧,“唤醒”静止期的CSCs,让它们重新进入增殖期,增加对临床化疗药物的敏感性,逆转肿瘤的耐药性,有望成为杀伤CSCs的一种新策略。据文献报道,缺氧诱导因子(HIF-1α)虽然是对缺氧反应的执行者