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第一部分建立骨质疏松SD大鼠BRONJ模型目的:建立骨质疏松SD大鼠BRONJ动物模型,为进一步探索其预防措施奠定基础。方法:12只Sprague-Dawley(SD)大鼠行双侧卵巢切除术后3月,皮下注射阿仑膦酸钠1.0 mg/kg/d,连续给药60 d后,拔除大鼠左侧下颌第一、第二磨牙。通过大体观察、Micro CT检查、组织病理学方法检测大鼠BRONJ的发病情况。结果:大鼠拔牙8 w后,给药组中4只大鼠出现拔牙窝未愈和、牙龈红肿、骨面暴露,影像学检测及HE染色均显示骨坏死形成,发病率为66.7%;而对照组所有大鼠拔牙窝完全愈合、未见牙龈明显红肿及骨面暴露,影像学及HE染色显示拔牙窝愈合良好。结论:去势后骨质疏松SD大鼠经皮下注射阿仑膦酸钠后拔牙可以建立BRONJ动物模型,且该方法稳定可靠,可以用于探索BRONJ机制及其预防措施的研究。第二部分PDGF-BB与BMP-2预防骨质疏松SD大鼠BRONJ的发生目的:探索拔牙窝填塞加载PDGF-BB/BMP-2的明胶海绵对骨质疏松SD大鼠发生BRONJ的预防作用,探讨对BRONJ的预防方法。方法:24只SD大鼠按照第一部分建立骨质疏松动物模型并皮下注射ALN,给药结束后随机分成4组,拔除大鼠左侧下颌第一、第二磨牙。Group 1:拔牙创填塞明胶海绵并减张缝合。Group 2:拔牙创填塞加载PDGF-BB的明胶海绵后减张缝合。Group 3:拔牙创填塞加载BMP-2的明胶海绵后减张缝合。Group4:拔牙创填塞加载PDGF-BB+BMP-2的明胶海绵后减张缝合。通过大体观察、Micro CT检查、组织病理学方法检测大鼠BRONJ的发病情况。大鼠下颌骨粘骨膜行免疫组织化学、免疫荧光检测下颌骨粘骨膜血管密度。ELISA法检测大鼠血清中VEGF、CTXⅠ值水平。结果:大鼠拔牙8 w后,大体检查发现预防组大鼠BRONJ发病率显著降低,且发病程度均较对照组轻,Micro CT扫描显示预防组拔牙窝较对照组愈合良好,拔牙窝骨量显著增高。免疫组织化及荧光检测均发现PDGF-BB预防组大鼠粘骨膜新生血管显著多于对照组。而各处理组与对照组相比,大鼠全身血液中CTXⅠ、VEGF值无明显差异。结论:皮下注射ALN的骨质疏松SD大鼠拔牙窝填塞加载PDGF-BB与BMP-2的可吸收明胶海绵能够显著降低BRONJ的发病率,且能够增加拔牙窝新生骨合成并提高骨量。PDGF-BB对预防拔牙后出现的BRONJ预防效果最佳,这可能与PDGF-BB促进局部新生血管生成有关。第三部分体外实验研究PDGF-BB预防BRONJ的相关机制目的:在体外实验中研究PDGF-BB对ALN预处理后的成骨细胞、血管内皮细胞功能的影响。以期探索PDGF-BB预防BRONJ的相关机制。方法:成骨细胞及血管内皮细胞在含不同浓度ALN的培养基中培养并预处理48 h,随后更换培养液并在含PDGF-BB的培养液中孵育48 h,通过CCK-8法检测成骨细胞与血管内皮细胞增殖活力,通过划痕实验及Transwell小室实验检测血管内皮细胞迁移能力。基质胶体外成血管实验检测血管内皮细胞及共培养细胞(处理后的成骨细胞与正常血管内皮细胞)体外成血管能力,并通过Image J软件进行分析。ELISA法检测成骨细胞终培养液中VEGF浓度。WB法检测血管内皮细胞FGF-2、VEGFA蛋白表达量水平。结果:PDGF-BB能够促进ALN预处理的血管内皮细胞增殖、迁移、体外成血管以及VEGFA、FGF-2蛋白表达,还能提高成骨细胞增殖、促血管生成能力及外分泌VEGF蛋白水平。结论:PDGF-BB能够逆转ALN对血管内皮细胞增殖、迁移、成血管能力及成骨细胞增殖、促血管生成能力的抑制作用。这一过程可能与PDGF-BB促进ALN预处理的血管内皮细胞表达VEGFA、FGF-2蛋白及成骨细胞外分泌VEGF蛋白有关。