安乃近(Dipyrone,DIP)属于毗唑酮类非甾体抗炎药,1922年最早在德国上市。由于其疗效确切,价廉易得,因此在人医和兽医临床上都有着广泛的应用,主要作为一些严重疾病的辅助对症药物。由于安乃近在兽医临床上的大量广泛使用和不合理用药,使得其在动物性食品中的残留对人类生命和财产的安全危害越来越大。目前,包括中国农业部、欧洲共同体药物评审委员会等组织都对安乃近在动物组织中(包括猪、牛和马)的最高残留限量(MRLs)做出了规定。安乃近被归类为一种典型的前药,它在体内迅速吸收、代谢,主要产生四种代谢产物：包括4-甲氨基安替比林(4-MAA)、4-甲酰氨基安替比林(4-FAA)、4-氨基安替比林(4-AA)和4-乙酰氨基安替比林(4-AAA)。其中MAA在体内存留时间最长、分布最为广泛,因此以上组织统一将其规定为安乃近的残留标示物。目前,未见关于安乃近及其代谢物在羊不同组织(肌肉、脂肪、肝脏和肾脏)中残留量的检测的报道。本论文研究的目的是建立一种快速、灵敏、可信的LC-MS/MS检测方法,用于检测羊组织(肌肉、脂肪、肝脏和肾脏)中安乃近四种代谢产物的残留。主要结论如下：1. LC-MS/MS法鉴定羊血浆中安乃近代谢物本试验通过给羊肌肉注射30mg/kg bw的安乃近,采集羊新鲜静脉血,离心后取血浆,采用三重四级杆质谱全扫描、子离子扫描、多反应监测和中性丢失扫描四种方式对血浆中的安乃近代谢物进行测定。试验证实血浆中存在安乃近的四种代谢产物AA、MAA、FAA和AAA,证明安乃近在羊体内的代谢和已知动物(包括猪、牛和马)相似。佐证了本试验中对羊组织中AA、MAA、FAA和AAA进行检测的合理性。2.羊肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中安乃近四种代谢产物残留方法的建立建立了一种快速、灵敏、可靠的LC-MS/MS方法用于安乃近代谢物在羊肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中的检测。本试验选用乙腈和氨水的混合溶液作为提取溶剂对组织中的代谢物进行提取,经过无水硫酸钠氯化钠脱水、浓缩和复溶后,过OasisTM MAX固相萃取柱净化,使用亲水作用色谱柱(HILIC)分离。待测物通过三重四级杆质谱正离子模式下多反应监测方式进行检测,外标法定量。结果显示4-甲氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林在添加量为4-200μg/kg范围内线性良好；4-氨基安替比林在添加浓度为40-2000μg/kg范围内线性良好,四种待测物在所有组织中的回收率都在84.7%～113.2%的范围内,相对标准偏差(RSD)均小于16.0%。MAA、FAA和AAA在各组织中的检测限均为0.08～1.2μg/kg,定量限为0.4～6μg/kg;AA在各个组织中的检测限均为2～25μg/kg,定量限为10～125μg/kg。3.实际样品检测本方法用于对大型超市、农贸市场购买的实际样品和动物试验给药后采集的样品进行检测。超市的实际样品检测中未检出安乃近四种代谢产物超过最大残留限量的浓度;动物试验的实际检测结果显示四种代谢物的残留量有随着停药时间的延长而逐渐降低的趋势。结果进一步验证了本方法在羊组织中检测安乃近四种代谢产物的可行性。综上所述,本研究首先确定安乃近在羊体内代谢产生了甲氨基安替比林、甲酰氨基安替比林、氨基安替比林和乙酰氨基安替比林四种主要代谢物。之后成功建立了在羊的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏这四种组织中同时检测安乃近四种代谢产物残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法,方法的灵敏度高,重现性好,准确度和精密度都能满足中国农业部兽药残留相关文件规定的要求。而且本方法经过检测实际样品的验证,可以用作安乃近残留的日常监管。