鸡源致病性沙门氏菌毒力基因与致病性的相关性研究

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沙门氏菌具有广泛的宿主,是一种重要的人畜共患病的病原菌。近年来,抗菌药物在临床上的普遍使用甚至滥用,导致沙门氏菌的耐药问题越来越严重。沙门氏菌能够入侵宿主体内增殖和致病,与其毒力基因密切相关。本研究对鸡源致病性沙门氏菌进行分离鉴定,对其耐药性、致病性进行测定,对其耐药基因、毒力基因进行检测,分析耐药基因与耐药表型、毒力基因与致病性的关系,为沙门氏菌病的防治提供科学依据。采集疑似病鸡的组织病料,通过SC增菌液对沙门氏菌进行增菌培养。用XLD琼脂平板对沙门氏菌进行分离培养。选取纯培养物的单个菌落,分别进行生化鉴定、血清学鉴定和PCR鉴定等,共获得55株沙门氏菌分离株。这些菌株包含4个血清群,A群6株,B群23株,C群1株,D群25株。其中D群约占45%,为沙门氏菌优势血清群。采用CSLI推荐的K-B琼脂法测定55株沙门氏菌分离株对18种抗菌药物的敏感性。结果显示,55株沙门氏菌分离株对利福平、阿莫西林、青霉素G、苯唑西林以及头孢噻吩的耐药率达到100%;对红霉素、林可霉素、多粘菌素B、复方新诺明及呋喃妥因耐药率达到90%以上;对强力霉素、链霉素及诺氟沙星的耐药率在50%~90%之间:对庆大霉素及大观霉素的耐药率在10%以下,分别为7.27%、3.64%。利用PCR方法检测55株沙门氏菌分离株的16种耐药基因blaTEM、blaPSE、blacMY、aadA1、Aph(3)-IIa、aadA2、tetB、tetG、tetM、tetX、Sul1、Su13、qnrA、qnrB、qepA、qnrS。结果显示,55株沙门氏菌分离株中,含有3种耐药基因的菌株比例为25.45%,含有5种耐药基因的菌株比例为21.82%,含有2种耐药基因的菌株比例为21.82%,含有4种耐药基因的菌株比例为20.00%,含有1种耐药基因和7种耐药基因的菌株比例分别为3.64%和1.82%。在所检测耐药基因中,tetX的检出率最高,达到78.18%,而blaPSE、Aph(3)-Ⅱa、aadA2、qnrA、qnrB则未被检出。利用PCR方法检测55株沙门氏菌分离株的31种毒力基因(质粒毒力基因spvR、spvA、spvB、spvC、spvD;毒力岛基因invH、sipA、sipB、sopA、sopD、avrA、hilA、iacP、prgK、ssaB、ssaQ、sifA、sseL、ssrA、ttrB、mgtC、misL、rmbA、rhuM、sugR、orf319、siiD(spi4D)、siiE、spi4H、sopB、pipC)。结果显示,质粒毒力基因的检出率均在60%以上;毒力岛基因ttrB和orf319检出率最高(92.73%),而ssaQ以及sifA检出率均在10%以下。通过小鼠致病性试验检测55株沙门氏菌分离株的致病性。结果显示,所有分离株对小鼠均具有致病性,但致死的时间和剂量有所差异。随机选取其中10株进行测定,其半数致死量(LD50)介于3.18×108cfu/mL和4×107cfu/mL之间。以上研究结果表明,本研究分离鉴定获得的55株鸡源致病性沙门氏菌分离株中,D群血清型比例约为45%,为优势血清群;沙门氏菌普遍存在耐药性,多重耐药现象严重;分离菌株对小鼠具有致病性;其耐药表型与耐药基因、致病性与毒力基因之间均呈现正相关。
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