细胞内的膜转运系统牵涉到多个层次的调控过程,包括货物分选、膜泡形成、膜泡运输及融合等。衔接蛋白Adaptin（AP）复合物是膜转运系统中的一种关键调控因子,可以识别目标蛋白并把其分选到运输膜泡内作为货物进行输送。现已发现五种衔接蛋白复合物（AP1-AP5）,其中AP3（adaptor protein complex3）主要参与从高尔基体／内体到溶酶体的转运工作。AP3由四个蛋白亚基组成,其中AP3D1的C末端含有一个非常保守的Ear结构域,它可以识别结合多种辅助蛋白形成运输膜泡,但目前该结构域的分子识别机制及由其所介导的生物学调控功能还不清楚。 蛋白质是生命现象的物质基础,而蛋白-蛋白之间的相互作用在生命活动中发挥着极其重要的作用,因此对它的研究可以了解蛋白质在生物体中的作用方式,从而揭示它在生物体内行使的功能。为了能够只通过一次筛选就可以找出Ear结构域的所有配体蛋白,在本论文中,我们利用酵母双杂交技术筛选随机多肽文库的方法,首先找出Ear结构域的结合多肽,然后通过生物信息学分析找出其结合规律并在蛋白质组水平上预测其所有的潜在结合蛋白,最后再通过实验验证新的配体蛋白。 在众多的研究方法中,酵母双杂交系统不仅可以研究活细胞体内的蛋白质相互作用、灵敏度高,而且不需对目的蛋白进行纯化,使实验操作简单易行,因此是研究蛋白质相互作用的一种强有力的方法。另外,我们筛选随机多肽文库,可以尽可能得到所有可能与目的蛋白AP3D1（AP3, deta1subunit）的Ear结构域结合的随机多肽序列,大大提高了文库筛选的效率。