【摘 要】
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为了探讨LncRNA AL022324.3在肝癌发展中的作用,我们进行了一系列实验研究。首先,我们进行了实时定量PCR实验,用来测量转染后的目的基因的沉默效率。结果表明,在转染后48小时
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为了探讨LncRNA AL022324.3在肝癌发展中的作用,我们进行了一系列实验研究。首先,我们进行了实时定量PCR实验,用来测量转染后的目的基因的沉默效率。结果表明,在转染后48小时目的基因沉默效率最高,沉默效率达到75%。接下来我们进行了MTT实验研究沉默目的基因对肝癌细胞增殖的影响,结果证明,沉默AL022324.3基因后,细胞的OD值与基因未沉默组相比明显降低,表明细胞增殖能力明显受到抑制,尤其是转染后第4天,细胞增殖抑制效果最为明显。总的OD值降低了25%以上。为了研究目的基因对肿瘤细胞划痕愈合能力的影响程度,我们进行了细胞划痕实验,实验结果表明沉默AL022324.3基因的细胞划痕愈合距离明显短于基因非沉默组。接下来为了研究目的基因对细胞迁移与侵袭能力的影响,在沉默AL022324.3基因后,观察到细胞迁移与侵袭能力均受到一定程度的抑制。裸鼠同种异体肝癌移植瘤形成实验表明,沉默AL022324.3基因后,与目的基因非沉默组相比,裸鼠体内移植瘤的增殖受到一定程度的抑制。我们从裸鼠移植瘤组织与HepG2、MHCC-97H肝癌细胞中提取RNA,并进行实时定量PCR实验,结果表明,在AL022324.3基因沉默组中,在体内和体外上皮-间质转化(EMT-Epithelial mesenchymal transition)相关基因的表达水平都发生了变化,如E-钙粘蛋白的表达增加和N-钙粘蛋白的表达下降。从培养的经过转染处理的肝癌细胞和裸鼠异种移植瘤组织中提取蛋白质进行蛋白质印迹实验,蛋白质印迹实验表明EMT相关蛋白的表达水平的变化与实时定量PCR实验结果基本一致,表明抑制AL022324.3的表达可以影响EMT相关蛋白的表达,影响肝癌细胞和肿瘤组织的迁移和侵袭及一定程度的影响细胞的增殖。
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