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目的：
探讨103pd放射性支架释放的γ射线对Fas基因表达的影响以及与胆管癌细胞凋亡的关系及意义。
方法：
人胆管低分化腺癌细胞株QBC939细胞培养培养于含10％胎牛血清的100U/ml青霉素、100 U/ml链霉素的RPMI-1640培养瓶,置于恒温37.5℃、5％CO2浓度、饱和湿度的培养箱中,当培养的细胞总数经细胞计数达5×107个以上,以胰酶消化、离心收集各瓶细胞。以培养液稀释制成1×107个/ml的细胞悬液。建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型,实验用BALB/c-nu小鼠购自中国医学科学院动物研究所,鼠龄8～10周,体质量15～20 g,雌雄不限。采取原代移植方法；选取肿瘤最大直径1.0cm以上、体质量大于20 g裸鼠36只,雌雄不限,随机分为103pd支架组和普通支架组,每组18只。实验组置入37MBq胆道放射性支架,对照组置入普通金属支架,支架置入后10d处死裸鼠计算肿瘤体积(V),其公式为V(mm3)=ab2/2。绘制肿瘤生长曲线图；应用TUNEL法检测胆管癌细胞凋亡的情况,结果判断:细胞核中有棕黄色浓染者为TUNEL阳性细胞,即凋亡细胞,高倍镜下计数单位视野内TUNEL阳性细胞数,3次计数求平均值作为凋亡细胞数。并计算出凋亡率。电镜下观察细胞超微结构；对103pd支架组和普通支架组的肿瘤以HE染色法进行病理学检测,验证其与人胆管细胞癌的同源性。免疫组化染色方法检测胆管癌细胞中Fas基因表达的情况,细胞浆呈棕褐色者为阳性细胞,细胞浆无棕褐色染色者为阴性细胞。阳性细胞计数分3级:低倍镜下(×10)1 cm2视野内阳性细胞数占细胞总数<1,3为(+),1/3～2/3为(++),≥2/3记为(+++),无阳性细胞为(一)。所有计量资料均以均数±标准差表示,应用SPSS 12.0统计分析软件,根据资料的不同情况采用不同的统计方法:①半定量资料采用x2检验:②定量资料采用方差分析,x2检验和秩和检验。检验水准α=0.05。
结果：
103pd支架组肿瘤大小及体积均无明显变化(P〉0.05)；普通支架组肿瘤体积较前有明显变化(P<0.05)；普通支架组较103pd支架组肿瘤体积明显增大(P<0.05),实验组肿瘤体积较对照组增长明显缓慢(P<0.05)。普通支架组胆管癌细胞Fas的表达(38.89％)明显低于103pd支架组(83.33％),两者Fas阳性细胞率比较差异有统计学意义(P<0.05)。103pd支架组可见棕黄色浓染的细胞核,而普通支架组未见明显棕黄色浓染样细胞核,103pd支架组细胞凋亡率为(79±2.4)％；普通支架组细胞凋亡率为(26±1.7)％(P<0.05)。
结论：
103pd放射性支架可诱导人胆管癌裸鼠移植瘤中胆管癌细胞凋亡,明显抑制胆管癌细胞生长。103pd放射性支架可能通过增强Fas基因表达促进胆管癌细胞凋亡,提高瘤细胞对放疗的敏感性,可能是其治疗胆管癌的重要机理之一。103pd胆管放射性支架可能是治疗胆管癌的一种新的、具有良好应用前景的治疗手段。
探讨103pd放射性支架释放的γ射线对Fas基因表达的影响以及与胆管癌细胞凋亡的关系及意义。
方法：
人胆管低分化腺癌细胞株QBC939细胞培养培养于含10％胎牛血清的100U/ml青霉素、100 U/ml链霉素的RPMI-1640培养瓶,置于恒温37.5℃、5％CO2浓度、饱和湿度的培养箱中,当培养的细胞总数经细胞计数达5×107个以上,以胰酶消化、离心收集各瓶细胞。以培养液稀释制成1×107个/ml的细胞悬液。建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型,实验用BALB/c-nu小鼠购自中国医学科学院动物研究所,鼠龄8～10周,体质量15～20 g,雌雄不限。采取原代移植方法；选取肿瘤最大直径1.0cm以上、体质量大于20 g裸鼠36只,雌雄不限,随机分为103pd支架组和普通支架组,每组18只。实验组置入37MBq胆道放射性支架,对照组置入普通金属支架,支架置入后10d处死裸鼠计算肿瘤体积(V),其公式为V(mm3)=ab2/2。绘制肿瘤生长曲线图；应用TUNEL法检测胆管癌细胞凋亡的情况,结果判断:细胞核中有棕黄色浓染者为TUNEL阳性细胞,即凋亡细胞,高倍镜下计数单位视野内TUNEL阳性细胞数,3次计数求平均值作为凋亡细胞数。并计算出凋亡率。电镜下观察细胞超微结构；对103pd支架组和普通支架组的肿瘤以HE染色法进行病理学检测,验证其与人胆管细胞癌的同源性。免疫组化染色方法检测胆管癌细胞中Fas基因表达的情况,细胞浆呈棕褐色者为阳性细胞,细胞浆无棕褐色染色者为阴性细胞。阳性细胞计数分3级:低倍镜下(×10)1 cm2视野内阳性细胞数占细胞总数<1,3为(+),1/3～2/3为(++),≥2/3记为(+++),无阳性细胞为(一)。所有计量资料均以均数±标准差表示,应用SPSS 12.0统计分析软件,根据资料的不同情况采用不同的统计方法:①半定量资料采用x2检验:②定量资料采用方差分析,x2检验和秩和检验。检验水准α=0.05。
结果：
103pd支架组肿瘤大小及体积均无明显变化(P〉0.05)；普通支架组肿瘤体积较前有明显变化(P<0.05)；普通支架组较103pd支架组肿瘤体积明显增大(P<0.05),实验组肿瘤体积较对照组增长明显缓慢(P<0.05)。普通支架组胆管癌细胞Fas的表达(38.89％)明显低于103pd支架组(83.33％),两者Fas阳性细胞率比较差异有统计学意义(P<0.05)。103pd支架组可见棕黄色浓染的细胞核,而普通支架组未见明显棕黄色浓染样细胞核,103pd支架组细胞凋亡率为(79±2.4)％；普通支架组细胞凋亡率为(26±1.7)％(P<0.05)。
结论：
103pd放射性支架可诱导人胆管癌裸鼠移植瘤中胆管癌细胞凋亡,明显抑制胆管癌细胞生长。103pd放射性支架可能通过增强Fas基因表达促进胆管癌细胞凋亡,提高瘤细胞对放疗的敏感性,可能是其治疗胆管癌的重要机理之一。103pd胆管放射性支架可能是治疗胆管癌的一种新的、具有良好应用前景的治疗手段。