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本试验以原代培养的鲤鱼肠上皮细胞为研究对象,在确定细胞培养的重要参数基础上,研究了谷氨酰胺对鲤鱼肠上皮细胞生长和代谢的影响。研究共包括3个试验:试验一、原代培养鲤鱼肠上皮细胞适宜的接种数量;试验二、原代培养鲤鱼肠上皮细胞的生长规律;试验三、谷氨酰胺对鲤鱼肠上皮细胞生长和代谢的影响。 试验一结果表明:原代培养鲤鱼前中肠上皮细胞的接种数量对细胞碱性磷酸酶活力有显著的影响(P<0.05),细胞碱性磷酸酶活力/细胞MTT吸光值与细胞接种数量呈显著的二次回归关系(P<0.05),根据直接法确定出细胞适宜的接种数量为350个/cm2。 试验二结果表明:细胞在接种培养143h时,大部分贴壁生长,形成小的细胞集落,少量细胞悬浮;培养至167h时,贴壁细胞生长成片,细胞呈典型上皮样,细胞单层生长,互不重叠,细胞多呈圆形;191h时,贴壁生长的细胞数量减少,细胞集落之间的空隙增多增大;239h时,细胞数量又开始增多,有些小细胞集落开始生长增大;263h时,细胞数量继续增多,有些小细胞集落已经汇合成片,形成较大的成片单层细胞。回归分析表明:贴壁生长的细胞数量与培养时间呈显著的二次回归关系,y=-3×10-5x2+0.0096x-0.6751(R2=0.6653,P<0.05),其中y—鲤鱼前中肠细胞MTT吸光值,x—接种培养时间(h),确定出在添加谷氨酰胺培养64h(即在接种培养160h)时,贴壁生长的细胞数量最多。 试验三结果表明:谷氨酰胺对贴壁生长细胞的数量、增殖率、碱性磷酸酶活力、肌酸激酶活力、蛋白沉积量、蛋白沉积率、谷丙转氨酶活力等有显著(P<0.05)或极显著的影响(P<0.01);对葡萄糖消耗量、乳酸和氨产量等影响不显著(P>0.05)。随着谷氨酰胺浓度的增加,细胞贴壁生长的数量、增殖率、碱性磷酸酶活力、蛋白沉积量、沉积率等极显著升高(P<0.01);贴壁生长细胞的数量、增殖率、碱性磷酸酶活力、蛋白沉积量和蛋白沉积率分别与谷氨酰胺水平呈显著或极显著的正相关(r1=+0.9463,P<0.01:r2=+0.9823,P<0.01;r3=0.9201,P<0.01;r4=+0.8978,P<0.05;r5=+0.9371,P<0.01);肌酸激酶活力、谷丙转氨酶活力、氨产量/谷氨酰胺消耗量分别与谷氨酰胺水平呈显著或极显著的负相关(r1=-0.8983,P<0.05;